microRNAs(miRNA)是一类由20～25个核苷酸组成的在翻译后水平抑制靶基因表达的非编码 RNA,普遍存在与多细胞生物中且数量客观。miRNA 的合成与成熟分为两个阶段: miRNA 基因被 RNA 聚合酶Ⅱ转录成 pri—miRNA,在细胞核内被 Drosha—DGCR8复合体剪切成约70个核苷酸的 pre—miRNA,pre—miRNA 经 Exportin 5转运出核后被 Dicer 在细胞质中剪切成约20个核苷酸的成熟 miRNA。到目前为止,对 miRNA 表达谱的研究集中在克隆和鉴定细胞质内成熟的 miRNA。有文献最近报道 Pri—miRNA 存在编辑和剪接水平的调控,导致 Pri—miRNA 出核后序列的改变和丰度的降低。本研究是通过串联亲和纯化(TAP) 和改进的紫外交联-免疫共沉淀(CLIP)偶联的方法鉴定细胞核内 DGCR8结合的 Pri— miRNA 表达谱。现已经将 DGCR8基因克隆到 TAP 中使用的表达载体 POZ 上,使用逆转录病毒的方法构建了稳定表达 POZ-DGCR8的 HL-60稳定细胞系,并且正在使用同样方法在 Hela S3中构建 POZ-DGCR8稳定细胞系。本研究预计在近期得到 POZ-DGCR8的 Hela S3 稳定细胞系,然后将通过 TAP—CLIP 和高通量测序的方法得到与 DGCR8结合的 Pri— miRNA 谱的克隆。