草鱼转录因子NFIL3基因克隆、表达分析与功能研究

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为了研究拉链蛋白转录因子NFIL3基因在草鱼(Ctenopharyngodon idella)免疫应答中所起的作用。我们利用RT-PCR和RACE方法克隆得到了草鱼NFIL3基因全长(Gen Bank号:KJ544519),经序列分析表明,NFIL3 c DNAq全长为2018bp,包含281bp的3’端UTR,330bp的5’端UTR和1440bp的ORF阅读框,其中ORF框编码468个氨基酸。同源性分析表明,草鱼NFIL3基因和斑马鱼相似度最高,达90%。利用荧光定量和Western blot技术对细菌感染后的草鱼免疫相关组织分析发现,在基因表达水平上,头肾和中肾组织内的NFIL3基因的表达水平显著上调,在蛋白表达水平上,头肾、中肾和肠组织内的NFIL3表达量显著提高。利用重组载体转染草鱼CIK细胞,发现NFIL3的超表达可减少嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)对细胞的入侵及其在细胞内的增殖。且超表达后的草鱼NFIL3可刺激NF-?B的激活,上调白介素IL10和IFN的表达。这些结果表明草鱼NFIL3基因与鱼类免疫调节有关,在细菌感染过程中可能发挥着重要作用。本研究为今后在草鱼免疫功能方面深入研究NFIL3基因,提供基础资料。
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