DNAJA4抑制NF-KB信号通路影响温热诱导的HaCat细胞周期阻滞

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目的:研究44度温热过程中热休克蛋白DNAJA4的作用及其机制。方法:使用10cm培养皿和DMEM培养基培养HaCat细胞,使用DNAJA4-sgRNA-EGFP lentivirus和Cas9-Puro lentivirus质粒敲除HaCat细胞中的DNAJA4基因。使用1ug/ml puromycin、免疫荧光、Wester-blot进行敲除验证。将种植了实验组和对照组细胞的培养皿放置于44摄氏度水浴孵箱干预30分钟,并放置会37度、5%CO2培养箱培养2小时,取出细胞分别提取总RNA进行qPCR检测和流式细胞检测相关的细胞因子表达和细胞周期变化。结果:温热可以诱导DNAJA4表达升高,表达峰值在温热干预后6-8小时。DNAJA4敲除可以引起NF-KB相关上有分子IL-1B,IL-1R1,IRAK1 and TRAF6 mRNA表达降低。同时发现Rel-A(P65)and P50亦下调。对照组HaCat细胞周期阻滞于G2/M期,而基因敲除组的细胞阻滞可以恢复。结论:温热诱导上调的DNAJA4可以影响NF-KB信号通路,并影响细胞周期。该变化可能参与了温热诱导抗病毒免疫过程。
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