论文部分内容阅读
目的代谢组学通过机体内小分子代谢物的总体变化规律,研究机体的生理生化状态和表型之间的联系。构建基于气相色谱-质谱(GC-MS)的人血清代谢指纹图谱分析平台,将为研究环境暴露的潜在健康效应研究提供重要技术支持。方法以健康体检人群血清为实验标本,采用Agilent 7890A-5975C气质联用仪,考察人血清样本代谢物提取方法、内标浓度的选择、衍生化试剂和条件以及仪器分析参数的设置对代谢图谱的影响,并利用仪器自带谱库NIST2008进行代谢物的鉴定。结果比较了蛋白沉淀溶剂甲醇、甲醇/乙腈(7:3)、甲醇/氯仿(3:1),样本/溶剂体积比(1:2,1:4,1:9),内标物十七酸浓度(0.05,0.10,0.20,0.25,0.50μg/μl),衍生化条件(BSTFA、MSTFA)对代谢谱图的影响,建立了人血清样本前处理方法,即以9倍体积甲醇/氯仿(3:1)作为代谢物提取溶剂,以BSTFA,60℃1h作为衍生化条件,0.20μg/μl作为内标浓度。GC-MS分析参数设置选用不分流进样方式,柱箱梯度升温程序采用初始温度80℃(2min),以8℃/min上升至180℃,5℃/min上升至240℃,再以15℃/min上升至300℃(6min),能够获得较为满意的分离效果。总离子流图(TIC)主要色谱峰NIST数据库检索共鉴定出结果较可靠的内源性化合物60个,包括氨基酸、有机酸、核苷、糖类、脂肪酸等。方法学验证结果表明,平行制各样本、单个样本连续进样6次以及样本经过三次冻融循环的谱图中15个共有化合物峰面积的相对标准偏差(RSD)均在10%以内,方法重复性好、精密度高。结论本研究建立的人血清代谢组学GS-MS方法稳定可靠,可用于人体血清代谢谱的高通量测试分析,筛选环境暴露早期生物标志。