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瓜类褪绿黄化病毒(Cucurbit chlorotic yellows virus,CCYV)属于长线病毒科(Closteroviridae)毛形病毒属的病毒。2009年行德欲等人在日本首次发现并报道了瓜类褪绿黄化病毒(CCYV),并报道CCYV通过B型和Q型烟粉虱进行传播,且能引起黄瓜、甜瓜、西瓜等植物褪绿黄化的症状。2010年Mitsuru Okuda等人完成该病毒基因组全序列测定。2008年以来,我国沿海城市的温室大棚中也出现了相似的症状,2011年古勤生等检测到瓜类褪绿黄化病毒(CCYV)。201 1年本实验在北京地区采集的黄瓜叶片上检测到了该病毒,并根据日本报道的瓜类褪绿黄化病毒(CCYV)全序列设计相应的特异引物,通过RT-PCR进行分段克隆并测序,序列拼接得到了瓜类褪绿黄化病毒(CCYV)北京分离物基因组的全序列(序列登录号RNA1为JQ904628,RNA2为JQ904629),其RNA1全长8 407nt,编码3个开放阅读框(ORF),5′非编码序列为73nt,3′非编码序列为250nt;RNA2全长8 041nt,编码8个开放阅读框(ORF),其5′非编码序列为1 034nt,3′非编码序列为221nt。将CCYV北京分离物与日本分离物进行序列一致性分析,结果显示RNA1的一致性为99.80%,其编码框ORF1a、ORF1b、ORF2、ORF3的一致性分别为99.78%、99.93%、99.37%、99.65%;ORF1编码的融合蛋白的氨基酸序列一致性为99.80%,ORF2与ORF3氨基酸序列一致性分别为100%、99.47%;RNA2的一致性为99.79%,ORF1-ORF8各编码框核苷酸序列一致性分别为100%、99.94%、100%、99.94%、100%、99.87%、99.72%、99.42%,氨基酸序列一致性分别为100%、100%、100%、100%、100%、100%、99.37%、98.59%。与台湾省Erlun分离物以及Yilan分离物的RNA2序列进行一致性分析,结果分别为99.85%和99.86%,与Erlun分离物各编码框的核苷酸序列一致性分别为100%、100%、100%、99.94%、100%、99.87%、99.79%、99.57%,氨基酸序列一致性分别为100%、100%、100%、100%、100%、100%、99.58%、99.06%;与Yilan分离物各编码框的核苷酸序列一致性分别为100%、100%、100%、99.94%、100%、100%、99.72%、99.57%,氨基酸序列一致性分别为100%、100%、100%、100%、100%、100%、99.37%、99.06%。对上述4个不同地区分离物RNA2的ORF及编码蛋白进行序列的一致性分析显示出ORF1、ORF3、ORF5最保守而ORF8基因变异较大。同时,本实验克隆了CCYV北京分离物的CP基因并将其导入pET-28a原核表达载体,转化大肠杆菌BL21菌株进行原核表达,获得纯化的CP蛋白,以免疫家兔制备特异性抗血清用于检测病毒。