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多发性硬化症(multiple sclerosis,MS)是中枢神经系统(central nervous system,CNS)内一种以特异性T细胞介导的自身免疫性脱髓鞘疾病。高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)是一类存在于真核细胞内的核蛋白。虽然人类对MS进行了多方面深入研究,但HMGB1在MS中的作用及潜在机制仍有待阐明。实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)是研究MS的经典动物模型,帮助人类深入了解可能参入MS的病理机制和治疗手段。目的:探讨HMGB1在CNS时间和空间的动态变化和阻断干预HMGB1后对EAE作用。方法:①Western Blot检测不同病程EAE即发病前期(Pre-onset)、发病初期(Onset)、高峰期(Peak)和缓解期(Remission)的脊髓组织HMGB1蛋白表达水平的规律性。免疫组织化学观察不同病程EAE脊髓HMGB1阳性细胞的表达并计数分析。②ELISA检测血清、脊髓组织匀浆和脑脊液(Cerebrospinal fluid,CSF)中HMGB1水平。③免疫组织化学细胞核复染和提取脊髓组织胞浆和核蛋白Western Blot检测HMGB1蛋白表达。④免疫荧光双标染色检测正常小鼠脊髓组织切片和模拟CNS内定居的神经元、星形胶质和小胶质细胞的细胞系(N2a、U87和BV2)HMGB1的表达和分布,同时检测不同病程EAE中HMGB1与神经元(NeuN)、星形胶质细胞(GFAP)和小胶质细胞(CD11b)共定位情况及其动态水平变化。⑤EAE发病初期分别腹腔注射甘草甜素(Glycyrrhizin,GL)或HMGB1特异性中和性单克隆抗体,评估小鼠临床评分、发病率、最高评分和发病初期时间点病程变化等临床指标特点。结果:①成功构建了EAE动物模型,根据EAE发病进展将其划分为发病前期、发病初期、高峰期和缓解期四期反映EAE发生、发展的过程。与正常C57BL/6小鼠(Normal组)相比,HMGB1蛋白水平伴随着EAE病程表达增多,且HMGB1蛋白表达于Onset达到最高峰。②与Normal组相比,血清、脊髓组织匀浆和CSF中HMGB1水平增多。③与Normal组相比,脊髓组织中定居于细胞核内的HMGB1中从细胞核向胞浆转位。④CNS中HMGB1表达于神经元、星形胶质细胞和小胶质细胞。与Normal组相比,胶质细胞被活化、增生,且HMGB1~+与GFAP~+和CD11b~+共定性于Peak时期达到最高峰。同时,EAE时神经元缺失,于Onset点HMGB1~+与NeuN~+共定位减少,Peak达到最高峰,Remission神经元形态结构开始恢复。⑤HMGB1阻断干预后缓解EAE临床症状。结论:HMGB1参与了EAE发生发展,可能是起始EAE病理进程的一个关键性事件,以HMGB1为靶点对改善MS/EAE预后和治疗提供了新思路。