【摘 要】
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<正> 目的:以基因重组技术将人白细胞介素18(hIL-18)和人端粒酶逆转录酶(hTERT)重组连接,构建融合基因的真核表达质粒PCDNA3.1(+),并在3T3细胞中表达融合蛋白hTERT-hIL18。方
【机 构】
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浙江大学医学院附属一院; 浙江大学传染病研究所;
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<正> 目的:以基因重组技术将人白细胞介素18(hIL-18)和人端粒酶逆转录酶(hTERT)重组连接,构建融合基因的真核表达质粒PCDNA3.1(+),并在3T3细胞中表达融合蛋白hTERT-hIL18。方法:将RT-PCR法扩增出hIL-18基因插入到PCDNA3.1 (+)中,酶切验证后,挑选出含有目标基因的正确克隆。hTERT经酶切后连接到hIL-18基因所在的PCDNA3.1(+),经酶切验证和测序分析两个基因是否已经正确连接到真核表达载体中。将hTERT和IL-18融合基因质粒转染3T3细胞中表达,经Western-blot验证。结果:hTERT-hIL18融合基因的真核表达载体PCDNA3.1(+)构建成功,经酶切验证和序列分析证实读码框的正确。Western-blot显示融合蛋白hTERT-hIL18能在3T3细胞中表达。结论:融合基因构建成功,并且融合蛋白hTERT-hIL18可以在真核表达载体PCDNA3.1(+)中表达,为进一步转染树突状细胞,研制肿瘤的治疗性疫苗提供基础。
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