【研究背景】偃麦草（Elytrigia repens（L.）Nevski）和黑麦（Secale cereal L）在小麦品种改良中得到了广泛的应用。基因组原位杂交（GISH）技术可用于识别在小麦背景下中间偃麦草、长穗偃麦草和黑麦的染色体。然而,GISH方法步骤繁琐,需要事先制备和标记探针序列,要对探针和染色体进行变性。NDFISH技术结合恰当的寡核苷酸探针,为区分和确定在小麦背景中的黑麦染色体提供了一种方便、高效的方法。然而,适合于区分小麦背景中的偃麦草染色体和识别黑麦染色体特异区段的寡核苷酸探针缺乏;【材料与方法】材料:普通小麦中国春、小麦品种绵阳11、黑麦Kustro、小麦-黑麦4RL^Ku易位系、小麦-长穗偃麦草部分双二倍体小偃68、小偃693、小偃7430、六倍体长穗偃麦草8802和小麦-中间偃麦草部分双二倍体材料中3;方法:ND-FISH;【结果与分析】本研究根据已发表的重复序列,开发了一些新的ND-FISH寡核苷酸探针;探针Oligo-pThp3.93可以取代GISH和常规FISH方法区分小麦背景中的长穗偃麦草和中间偃麦草染色体;探针Oligo-5BL.46、Oligo-5A 8080和Oligo-44分别在黑麦Kustro的1RS^Ku、5RS^ku和5RL^Ku染色体臂上产生信号;探针Oligo-5A8080.1与探针Oligo-45相结合,可同时区分黑麦1RS^Ku、5RS^Ku和6RS^Ku染色体;探针Oligo-1AL.73只在黑麦4R^Ku和7R^Ku染色体上产生信号。此外,Oligo-1AL.73还有助于构建更精细的4R^Ku染色体FISH图谱,并有助于确定4RL^Ku在不同小麦-黑麦4RL^Ku易位系上的物理断点位置。【结论】:这些寡核苷酸探针为今后小麦育种中的偃麦草和黑麦种质资源的利用提供了一条方便的途径。