【摘 要】
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【目的】磺胺类抗生素被广泛用于畜牧养殖业中动物疾病的治疗,但是其在养殖业中的滥用会导致动物源食品中抗生素的残留,进而威胁到人们的健康。本文的目的是开发动物性食品中
【基金项目】
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国家重大研发计划项目(2016YFD0401101)支持
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【目的】磺胺类抗生素被广泛用于畜牧养殖业中动物疾病的治疗,但是其在养殖业中的滥用会导致动物源食品中抗生素的残留,进而威胁到人们的健康。本文的目的是开发动物性食品中磺胺类抗生素残留的快速检测方法。【方法】使用四种半抗原与牛血清白蛋白偶联合成免疫原免疫小鼠,七种半抗原与卵清白蛋白偶联合成包被原筛选小鼠。结果表明带有嘧啶环的半抗原S5合成免疫原和带有直链的半抗原S3合成包被原是最好的组合。【结果】制备出的单克隆抗体对二十七种磺胺类抗生素的半数抑制浓度范围为0.15-15.38μgL-1。并且对磺胺二甲基嘧啶、磺胺喹恶林、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶和磺胺甲恶唑这五种鸡蛋、牛奶和肉中必检的磺胺类抗生素的半数抑制浓度分别为:0.51,0.15,0.56,0.54,和2.14μg L-1,该灵敏度对于这五种必检药物的快检方法有重要意义。在此广谱单克隆抗体的基础上,开发了胶体金免疫层析试纸条快速检测方法。利用柠檬酸三钠还原法制得平均粒径20nm的胶体金,将胶体金与单克隆抗体相连,所形成的金标抗体包被在金标垫上,包被原和羊抗鼠二抗分别包被在硝酸纤维素膜(NC膜)上作为检测线(T线)和质控线(C线)。将待测液滴加到样品垫上,10min后可在NC膜C线和T线位置上用肉眼观察到胶体金的颜色(红色),通过比对颜色的深浅判断样品中磺胺类抗生素的含量。该方法对于蜂蜜样本中二十七种磺胺类抗生素的可视检测限均在10μg kg-1以下,该灵敏度可以满足国内外各类规定。用该胶体金免疫层析试纸条对阳性蜂蜜样本和猪肝样本进行分析,分析结果与高效液相串联质谱的分析结果一致,证明该快速检测方法可以应用于大批量蜂蜜样本和猪肝样本的快速检测。【结论】基于群选性的抗磺胺类抗生素单克隆抗体建立的免疫层析试纸条分析方法适用于牛奶和猪肝样本中磺胺类抗生素的现场快速检测。
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