【摘 要】
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为了建立能特异检测我国基因I型狂犬病病毒(RABV)的核酸检测方法,针对我国RABV N基因保守序列设计并合成了一套简并引物和Taqman探针,在优化反应条件的基础上,建立了特异检测我
【机 构】
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解放军军事医学科学院军事兽医研究所,长春130062
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会
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为了建立能特异检测我国基因I型狂犬病病毒(RABV)的核酸检测方法,针对我国RABV N基因保守序列设计并合成了一套简并引物和Taqman探针,在优化反应条件的基础上,建立了特异检测我国RABV的一步法Taqman荧光定量RT-PCR(FQ-PCR)检测方法。用本实验室已知滴度的SRV9细胞毒总RNA作为标准品,该标准品可于定量临床样品中的病毒滴度,所建立的FQ-PCR方法可以灵敏地检测出4.68个TCID50的病毒含量。然后用建立的方法对237份送检的唾液样品和117份送检犬脑组织样品进行检测,在唾液样品检测中,FQ-PCR方法检测出7份阳性唾液,套式RT-PCR只检测出5份阳性唾液,MIT未分离到病毒;在脑组织样品检测中,FQ-PCR检测出17份阳性脑组织且与套式RT-PCR的符合率为100[%],FAT检测出16份阳性脑组织,MIT共鉴定出14份阳性样品,病毒分离阳性率为82.4[%](14/17)。由此表明本荧光定量RT-PCR方法在检测我国狂犬病临床样品上具有潜在的应用价值。
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