细胞毒性试验是一类简单,快捷,有效的利用体外培养的哺乳动物细胞进行毒性检测的方法。体外细胞毒性试验具有通用性,广泛的适用于各种化合物、医疗器械和材料的评价。主要测试途径为:细胞形态的观察,细胞损伤的测定,细胞生长的测定和细胞代谢特性的测定。国家标准GB/T16886.5于2018年7月份生效,此次生效距离上一个版本已近15年。新生效版本紧跟国际ISO标准前沿,并保证了在方法学上与国际标准的近乎等同,让国内申报数据与产品注册更好的与国际接轨。在上一个版本,国家标准较为笼统的阐述了细胞毒性的试验方法,试验材料以及方法类别,此次升级最主要的更新为:详细描述了细胞毒性形态学的定性分级,详细描述了琼脂和滤膜扩散法以及直接接触试验分级,另添加了附录为具体的试验方法和数据采集提供了重要参考。新标准中可以总结出较为常用的试验类型如下:直接接触细胞毒性试验,琼脂糖扩撒法细胞毒性试验,MEM洗脱试验(形态观察法),MTT细胞毒性试验等。鉴于化合物或者医疗器械一般仅选用其中一种检测方法用于法规申报或者毒性研究,方法的选用至关重要。直接接触法中需将供试品制成规定的形状,将供试品直接放置于细胞层,能较为直接的评估到供试品对细胞层的毒性影响。此法对供试品要求较为严苛,密度过大或者过小都将影响试验的操作和评估,操作时需注意防止不必要的移动,否则会导致细胞的物理性损伤。相比于直接接触法,琼脂细胞毒性试验通过在细胞层上附加一层琼脂或者琼脂糖,克服了直接接触法易导致物理性损伤的缺点,但该试验不适用于不能通过琼脂层扩散或可能与琼脂相互作用的可沥滤物,使用琼脂糖试验进行细胞毒性评定应进行论证。MEM洗脱试验为美国药典推荐试验,使用供试品浸提液/溶液给药,等同于该标准下的形态观察法,通过显微镜观察评价诸如一般形态、空泡形成、脱落、细胞溶解和细胞膜完整性等方面的改变。新标准生效后为评分0-4五个等级,较原标准多了个一个等级,且更为详细和标准化,但该法为主观评分对技术员要求较高需要有一定的观察经验。相对于MEM洗脱试验,MTT细胞毒性试验更为客观。MTT细胞毒性试验为国内较为广泛的细胞毒性检测方法,黄色水溶液MTT在活细胞内代谢性还原,生成蓝紫色不可溶的甲臜。活细胞的数目与甲臜溶于醇类后用光度计测定的色度相关。在原标准内未对该法有详尽的描述,标准方法需参考GB14233,新标准生效将使得该试验更为有据可循。