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参考GenBank中100个H5亚型禽流感病毒分离株的HA基因核苷酸保守序列设计引物和TaqMan探针，对荧光定量RT-PCR应体系和条件进行优化，并对该方法进行评价。结果表明：该方法对H5N1亚型和H5N2亚型禽流感病毒灭活抗原均有阻性扩增，对H7、H9亚型禽流感病毒、健康鸡、鸭组织及其它家禽常见病原RNA无扩增；敏感度高，最低检测限为21个拷贝质粒DNA；可重复性好，批内变异系数及批间变异系数分别为2.01％和4.93％；检测速度快，从样本处理到报告结果仅需4h。本研究建立的荧光定量RT-PCR方法为H5亚型高致病性禽流感病毒的快速检测提供了有力工具。