目的:构建人骨形成蛋白2(human bone morphgenetic protein 2,hBMP—2)真核表达载体并观察其体外表达情况。方法:由人成骨肉瘤细胞中提取细胞总RNA,利用RT—PCR方法扩增获得人BMP2基因cD-NA,将基因片断重组到pGEM—T质粒中构建pGEM—T—hBMP—2重组质粒载体,转化到大肠杆菌DH5α后筛选阳性克隆,利用限制性酶切和DNA序列分析鉴定重组质粒。分别用RcoRI和NotI双酶切pGEM—T—hBMP—2质粒和pcDNA3.1真核表达载体,将克隆载体中人骨形成蛋白2基因重组到pcDNA3.1真核表达载体,提取质粒作酶切电泳、PCR鉴定及DNA测序后,用脂质体体外转染小鼠骨髓基质细胞,RT—PCR检测BMP2的表达。结果:人骨肉瘤细胞总RNA经RT—PCR扩增后,获得1.2kbp条带。经酶切电泳、PCR鉴定及DNA测序证实本实验成功克隆BMP—2基因、重组质粒pcDNA3.1—hBMP—2构建正确;该重组质粒能在体外培养的小鼠骨髓基质细胞中有效表达BMP2。结论:通过该方法能成功克隆获得hBMP—2基因,并构建其真核表达载体。