腺病毒载体转染小鼠C2C12细胞方法的探讨研究

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研究目的:用腺病毒载体(Ad-phb1)转染小鼠C2C12细胞,观察在不同浓度相同时间和不同时间相同浓度情况下腺病毒载体转染小鼠C2C12的转染效率高低,确定腺病毒转染C2C12细胞的最适宜浓度和时间,及对小鼠C2C12细胞生物学特性的影响。研究方法:培养小鼠C2C12细胞,在C2C12细胞生长达到80%时,以不同浓度腺病毒分5ul、10ul、15u13组转染C2C12细胞,并设立一组空白对照组(无腺病毒转染的C2C12细胞),观察细胞生物学特性。孵育48h后用流式细胞仪测定4组细胞中腺病毒的转染效率。根据流式细胞仪的结果确定最适宜的转染浓度。用单因素方差分析法和独立样本T检验,检验组间差异的显著性,P<0.001,P<0.05四组间均具有显著性差异。用最适宜的转染浓度转染C2C12细胞,在相同转染浓度下以不同时间分为24h、36h、48h、60h4组,并设立一组空白对照组(无腺病毒转染的C2C12细胞),孵育后用流式细胞仪测定不同时间下的转染效率。用单因素方差分析法和独立样本T检验,检验组间差异的显著性,P<0.001,P<0.05五组间均具有显著性差异。研究结果:腺病毒载体(Ad-phb1)转染小鼠C2C12细胞后,不同浓度转染C2C12细胞的效率不同。当相同转染时间时,对照组、5ul浓度组、10ul浓度组、15ul浓度组的转染效率不同且15ul浓度组转染效率最高,细胞生长状况良好,形态未发生改变。而当相同转染浓度时,对照组、24小时组、36小时组、48小时组和60小时组的转染效率不同且48小时组转染效率最高,细胞生长状态良好,细胞形态未发生变化,而60小时组转染效率也显著,但细胞形态发生改变,C2C12细胞由梭形变成了不规则菱形,故48小时组转染效果最好。研究结论:本实验是关于腺病毒载体(Ad-phb1)转染小鼠C2C12细胞的转染效率的摸索,在15ul腺病毒浓度下,C2C12细胞的转染效率最高。及其在转染48h时,C2C12细胞的转染效率最高,且此种情况下,对C2C12细胞生物学特性影响不大。
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