目的探讨TET3介导的5hmC羟甲基化修饰在激素性股骨头坏死中的发病作用及其机制。1.收集激素性股骨头坏死与股骨颈骨折患者股骨头标本,检测TET1、TET2、TET3和5hmC水平改变。2.分别以1 uM地塞米松干预MLO-Y4细胞2h、4h、8h和12h,CCK8、台盼蓝、Edu染色检测细胞活性,TUNEL染色检测细胞凋亡,进一步检测凋亡相关Bcl-2、Bax和Cleaved Caspase-3水平改变,同时分析地塞米松干预后5hmC水平改变。3.1uM地塞米松干预MLO-Y4细胞4h和12h后,进行hMeDIP-chip分析。4.建立激素性股骨头坏死大鼠模型,髓腔注射TET3 siRNA敲低TET3的表达,检测其对于激素性股骨头坏死的影响。1.激素性坏死股骨头局部TET3 mRNA和蛋白表达水平明显升高,而TET1、TET2的变化不显著;同时斑点杂交表明坏死组5hmC水平明显上调。2.体外实验,地塞米松干预MLO-Y4不同时间后,活细胞数目及细胞增殖逐渐减少,细胞凋亡逐渐增加,Western表明Bcl-2/Bax比值逐渐减少,而Cleaved Caspase-3逐渐增加。斑点杂交和免疫荧光染色显示5hmC水平呈时间依赖性富集。3.hMeDIP-chip显示地塞米松诱导表观遗传学修饰改变的下游基因主要与PI3k-Akt、Notch、Wnt、Apoptosis等信号通路相关,qPCR进一步验证了Akt信号通路相关基因的表达变化。使用siRNA降表达TET3后能够明显抑制地塞米松诱导的MLO-Y4细胞凋亡,但降表达TET和TET2无明显作用;同时,敲低TET3后地塞米松诱导的5hmC水平上调及Akt信号通路改变被明显抑制。4.动物实验表明,敲低TET3明显抑制骨细胞凋亡;HE染色显示坏死组出现大量空骨陷窝和髓腔内脂肪空泡,而敲低TET3后显著减少;Micro-CT与核磁的异常改变在敲低TET3后均明显恢复。1.激素性股骨头坏死患者标本TET3-5hmC水平明显升高;2.体外实验,地塞米松干预MLO-Y4骨样细胞后,TET3-5hmC及凋亡相关基因发生明显变化;3.hMeDIP-chip表明地塞米松诱导5hmC异常改变主要与Akt信号通路相关;4.体内和体内实验中,敲低TET3均能够显著抑制糖皮质激素的负向作用,这些结果表明TET3可能是治疗激素性股骨头坏死的潜在靶点。