腺相关病毒介导TGF-β1修饰脂肪间充质干细胞成软骨细胞

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目的:研究腺相关病毒介导TGF—β1修饰脂肪间充质干细胞后,诱导其向软骨细胞转化。方法:选取6月龄新西兰大白兔,分离提取ADSCs并传代培养。选用第三代ADSCs进行转染。转染分三组:分别为TGF—β1载体组(rAAV2—TGFβ1—IRES—EGFP转染)、空载体组(rAAV2—EGFP转染)和空白组。转染后用丁酸钠促进目的基因表达,采用半量换液的方法进行培养。对转染后收集到的培养液进行Elisa法检测TGF—β1浓度。分别对转染14天和21天的细胞进行免疫组化染色和甲苯胺兰染色。结果:从脂肪组织中成功分离提取出ADSCs,并进行了传代培养。细胞呈扁平状和长梭形,细胞形态均一,传代稳定。观察到TGF—β1载体组和空载体组有较多荧光细胞,而空白组至始至终没有荧光细胞。转染14天和21天后,TGF—β1载体组免疫组化染色观察到Ⅱ型胶原、甲苯胺兰染色观察到蛋白多糖。结论:腺相关病毒载体能将TGF—β1基因转染ADSCs,基因表达需用增强剂辅助。腺相关病毒介导TGF—β1转染后,ADSCs成功向软骨细胞分化。通过基因转染方法诱导ADSCs向软骨细胞分化所需的TGF—β1浓度低于外源性诱导。
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