Rubisco活化酶（Rubisco activase,RCA）是一种由核基因编码的可溶性叶绿体蛋白,广泛存在于光合生物中,在叶绿体内具有激活光合碳同化限速酶Rubisco的功能。随着对Rubisco活化酶研究的深入,不同植物的Rubisco活化酶基因相继被克隆,发现Rubisco活化酶基因的表达具有复杂性。为了揭示枣中Rubisco活化酶基因的种类和表达方式,本研究中对枣Rubisco活化酶基因进行了序列克隆和生物信息学分析。以‘星光’枣的叶片为试材,提取RNA经反转录获得cDNA。利用同源序列克隆和3’RACE技术进行PCR扩增,PCR产物经克隆测序后,对所获序列进行Blast比对分析,同时进行开放阅读框、氨基酸序列及保守结构域预测,并分析蛋白质一级、二级和三级结构。利用DNAMAN软件对获得的Rubisco活化酶基因的开放阅读框对应的核苷酸序列和编码的氨基酸序列进行比对分析。首次从枣中扩增获得两个Rubisco活化酶基因的全长序列,基因名称和登录号分别为ZjRCA1（KF530839）和ZjRCA2（KF530840）。ZjRCA1的开放阅读框长度为1 416 bp,编码471个氨基酸,预测该蛋白的分子式为:C₂₂₈₅H₃₅₉₇N₆₂₁O₇₀₇S₂₃,分子量约为51.8 kD,理论等电点为5.73;经保守结构域预测,该蛋白属于AAA⁺家族;在整个氨基酸序列中,形成α-螺旋、β-折叠和无规则卷曲的氨基酸分别占氨基酸总量的38.22%、14.65%和47.13%,并且氨基酸序列中含有RCA亚基特有的"P-环"序列;由同源建模比对和三级结构预测结果可知,枣ZjRCA1含有AAA ATPase核心保守结构。ZjRCA2的开放阅读框长度为1 320 bp,编码439个氨基酸,预测该蛋白的分子式为:C₂₁₂₆H₃₃₆₀Y₅₈₆O₆₄₉S₂₁,分子量约为48.2 kD,理论等电点为6.28;经保守结构域预测,该蛋白也属于AAA+家族;在整个氨基酸序列中,形成α-螺旋、β-折叠和无规则卷曲的氨基酸分别占氨基酸总量的32.35%、12.76%和54.90%,并且氨基酸序列中同样含有RCA亚基特有的"P-环"序列;同源建模比对和三级结构预测结果表明,枣ZjRRCA2也含有AAAATPase核心保守结构,并且枣ZjRCA2和ZjRCA1的三级结构预测结果相同。利用DNAMAN软件分别对开放阅读框对应的核苷酸序列和编码的氨基酸序列进行比对,结果发现枣中的两个RCA亚基是由两个独立的基因所编码。