目的：为了建立快速检测Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒PCR方法. 方法：根据NCBI公布的来自中国不同省份的的Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒的基因序列,找出其保守序列,设计合成两对引物,在一个PCR反应管中进行PCR反应,并进行条件优化. 结果：该方法敏感性高,最低能检出5.3pgⅠ型鸭肝炎病毒和2.7pg鸭瘟病毒的RNA或DNA模板.其特异性强,对番鸭细小病毒(MDPV),鹅细小病毒(GPV),新城疫病毒(NDV)和流感病毒(AIV),鸭减蛋综合征病毒(EDSV),禽网状内皮组织增生症病毒(REV),鸭坦布苏病毒(DTMUV),禽呼肠弧病毒(ARV)8种病毒的检测均为阴性,Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒检测结果为阳性.用建立的方法检测了江苏徐州采集的100份样品,Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒的阳性率分别为1.2％和26％. 结论：建立了Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒一步法PCR检测方法.