【摘 要】
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目的:1.探索建立刀豆蛋白A（Concanavalin A,Con A）诱导的慢性肝损伤模型的方法;2.了解细胞毒性T细胞（CTL）、T辅助细胞（Th）、细胞因子网络（TNF-α、IFN-γ、IL-18、IL-10）与肝损害的关系,探讨T细胞亚群和细胞凋亡机制在此模型中的作用;3.探讨补肾健脾方对此模型保护作用的免疫学机制及其治疗慢性肝病的理论依据。方法:雄性BALB/c小鼠随机分为4组:正常组、
【出 处】
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首届国际中西医结合肝病学术会议论文汇编
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目的:1.探索建立刀豆蛋白A（Concanavalin A,Con A）诱导的慢性肝损伤模型的方法;2.了解细胞毒性T细胞（CTL）、T辅助细胞（Th）、细胞因子网络（TNF-α、IFN-γ、IL-18、IL-10）与肝损害的关系,探讨T细胞亚群和细胞凋亡机制在此模型中的作用;3.探讨补肾健脾方对此模型保护作用的免疫学机制及其治疗慢性肝病的理论依据。方法:雄性BALB/c小鼠随机分为4组:正常组、模型组、补肾组、补肾健脾组。除正常对照组外,其余小鼠进行造模,按ConA5mg/kg给药量尾静脉注射每周3次,共3w。检测以下指标:1.血清ALT、AST含量;2.ELISA法检测外周血淋巴细胞上清液中TNF-α、IL-18、IFN-γ、IL-10含量;3.RT-PCR法检测肝内细胞因子TNF-α、IL-18 mRNA的表达;4.抗PE和FITC-单克隆抗体双染色法流式细胞仪检测外周血及肝内淋巴细胞亚群比例及活化状态;5.肝脏、脾脏组织HE染色;6.免疫组织化学观察肝脏内Fas的表达;7.电镜观察肝组织超微结构的改变; 结果:1.按ConA5mg/kg给药量每周3次尾静脉注射造模3w,模型组小鼠血清ALT及AST明显升高,肝脏病理显示有明显慢性肝损伤表现;2.与正常组比,补肾方及补肾健脾方均可改善模型小鼠的宏观证候学表现,并可降低血清ALT、AST（P<0.05）,提高小肠D木糖的吸收率（P<0.05）。3.与正常组比,模型组TNF-α、IL-18、IL-10含量明显升高（P<0.05）,IFN-γ（P<0.05）含量下降,RT-PCR显示TNF-α、IL-18mRNA表达增强,免疫组化显示Fas抗原表达增强,肝内CD4+T细胞活化比例明显增加,CD8+T细胞活化比例下降,外周血T淋巴细胞亚群的活性无明显变化;4.补肾健脾方干预后肝内CD4+T淋巴细胞活化受到明显抑制,CD8+T淋巴细胞活性增强,TNF-α、IL-18mRNA表达及含量均下降,IFN-γ含量升高,免疫组化Fas抗原的表达减弱,对IL-10含量无明显影响。结论:1.按ConA5mg/kg给药量造模2w,可以明显诱导慢性肝损伤,造模方法简单,易于操作,致死率低,模型稳定可靠。2.ConA诱导肝损伤模型的可能通过以下机制:诱导TNF-α及IL-18的mRNA表达,上调IL-10等细胞因子的含量,降低IFN-γ的含量,活化CD4+T淋巴细胞,诱导肝细胞Fas抗原的表达,诱导肝损伤慢性化进程。3.补肾健脾方可明显降低TNF-α及IL-18mRNA的表达,上调IFN-γ含量,促使细胞因子网络紊乱状态的复常,抑制CD4+T细胞的含量及其活性,活化CD8+T细胞,抑制肝细胞Fas抗原的表达,阻断细胞凋亡的发生。
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