【摘 要】
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为快速检测禽腺病毒-I群(Fowl adenovirus, FAV-I)感染,且能有效区分常见混合感染的新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)和传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis
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为快速检测禽腺病毒-I群(Fowl adenovirus, FAV-I)感染,且能有效区分常见混合感染的新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)和传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus, IBV),本研究建立了多重PCR诊断方法。根据Gen Bank发表的FAV-Ⅰ的Hexon基因、NDV的F基因和IBV的N基因分别设计了3对特异性引物,通过对引物浓度、退火温度等反应条件的优化建立多重PCR诊断方法,并对该方法进行了特异性和敏感性研究,且对临床样本进行检测。研究结果发现本试验建立的多重PCR方法可准确扩增出大小为895bp(FAV-I)、1600bp(IBV)和529bp(NDV)的特异性片段;3种引物最佳浓度分别为3pmol/μL、3pmol/μL和6pmol/μL,最佳退火温度为55℃;该方法对3种病毒的最低检测限分别为1.46×105copies/μL、8.93×102copies/μL和2.11×104copies/μL;且该方法不能扩增出减蛋综合征病毒、马立克病毒、鸡传染性贫血病毒和H9亚型禽流感病毒等,临床样品检测结果与单项PCR结果相同。研究结果表明,本试验建立的多重PCR检测方法具有较高的敏感性、特异性和稳定性,可有效地区分FAV-I、NDV、IBV。
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