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目的:幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是长期定植于胃内的感染性病菌,与多种胃肠道疾病密切相关,然而,由于抗生素的广泛使用,幽门螺杆菌对抗生素耐药不断增加。克拉霉素是大环内酯类抗生素,其作用是与核糖体上的23S rRNA相结合,通过干扰蛋白质的合成达到杀菌作用。AcrAB-TolC外排泵是革兰氏阴性菌多药耐药的主要占优势的外排系统,其中hefA、hefD及hefG基因与编码其外膜通道蛋白。探究敲除AcrAB-TolC外排泵相关基因是否可以预防Hp耐药,为幽门螺杆菌的根除提供理论依据。方法:检测野生株Hp 26695及敲除株△hefA、△hefD、△hefG:采用E-test的方法最小抑菌浓度(MIC),采用激光共聚焦显微镜检测在克拉霉素作用下的生存率,扫描和透射电镜检测形态差异,荧光外排实验检测荧光染料Hoechest 33342的积聚量;克拉霉素诱导耐药过程中检测Hp 26695和敲除株△hefA,、△hefD及△hefG的基因突变情况。结果:①敲除株△hefA、△hefD、AhefG与野生株Hp26695相比,最小抑菌明显降低;②经克拉霉素处理后,敲除株△hefA、△hefD、AhefG与野生株Hp26695相比,其菌体损伤和死亡较野生株更多;③敲除株△hefA、△hefD、AhefG与野生株Hp26695相比,Hp的形态结构破坏;④敲除株△hefA、△hefD、△hefG与野生株Hp 26695相比,其荧光积累量均增高,且有显著差异(P<0.05);⑤Hp 26695在1×MIC诱导阶段出现了耐药基因突变,其敲除株△hefD和△hefG也都在1/2×MIC阶段发生了耐药基因突变,而△hefA基因在4×MIC才发生耐药基因突变。结论:Hp外排泵相关基因hefA、hefD及hefG基因敲除后,在克拉霉素诱导耐药过程中,敲除hefA外排基因可以预防克拉霉素耐药,hefD和hefG则无此作用。