论文部分内容阅读
AP-2复合体广泛分布于真核生物中并以异源四聚体的形式行使生物学功能。在哺乳动物中,AP-2复合体是网格蛋白的衔接因子并参与质膜囊泡的运输,但它在丝状病原真菌中的生物学功能尚不明确。本研究以病原真菌——禾谷镰刀菌为研究对象,分析了AP-2复合体的生物学功能。研究表明:AP-2复合体各个亚基(FgAP2α,FgAP2β,FgAP2σ和FgAP2mu)的缺失均严重地影响了菌落的生长、分生孢子的数量及形态、膈膜及细胞核数目和侵染致病能力。相比于野生型PH-1,各基因敲除突变体的分生孢子萌发异常,出现多个方向且粗短的萌发管,萌发后的菌丝生长变得弯曲且菌丝尖端产生多个分支,这些结果表明AP-2复合体的缺失造成极性维持的丧失。为了进一步证明AP-2复合体参与调控禾谷镰刀菌极性生长,顶体蛋白marker LifeActin-GFP被分别转入野生型及/△Fgap2α中。相较于野生型,我们发现FgAp2α缺失使得LifeActin-GFP在菌丝顶端产生多个荧光位点,表明影响了菌丝尖端极性的维持。亚细胞定位表明AP-2复合体定位于菌丝尖端的内吞颈环及菌丝隔膜处,并与肌动蛋白组件（AbpA-mCherry和Life-Actin-mCherry）、内吞作用相关蛋白（SagA-mCherry和Sla2-mCherry）及磷脂翻转酶（DnfAGFP和DnfB-GFP）共定位。此外,我们发现AP-2复合体不与早期内含体共定位并且其各亚基的缺失不影响FM4-64染料所示踪的内吞过程,网格蛋白轻链ClaL也不与AP-2复合体共定位,这些结果表明禾谷镰刀菌中AP-2复合体的生物学功能和哺乳动物的存在差异。