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双孢蘑菇[Agaricus bisporus(Lange).Singer]是世界上人工栽培最广泛、产量最高、消费量最大的食用菌。迄今关于双孢蘑菇纤维素酶系相关基因及其表达调控机制的研究尚属空白。本研究以国内广泛栽培的双孢蘑菇菌株As2796为材料,收集菌丝,提取DNA,利用同源简并引物进行外切葡聚糖酶(Cellobiohydrolase I)基因cbh1和碳代谢抑制(carbon catabolite repression,CCR)阻遏因子基因(crel)的克隆。(1)针对cbh1基因,设计引物Prime-F:AATCGAGCCAGAGCATGTTG和Prime-R:CAAGTGGATCAATGGCGAGG,经PCR扩增和测序后,得525bp的基因序列,经比对分析,发现该序列与侧耳CBH1基因的部分序列相似度为40.60%,与杏鲍菇CBH1基因的部分序列相似度为40.43%,与大杯香菇的CBH1基因的部分序列相似度为36.22%,blast搜索比对没有找到与该序列高度相似的基因;(2)针对cre1基因,设计引物Cre1F:ARAAGCCYCAYGCYTGCCAGT和Cre1R:GCVGTMGAGTTGGGCGA RTT,经过PCR扩增、测序后得到505 bp的DNA序列,将该基因与其它真菌Cre1基因的部分基因比对后,发现其与哈茨木霉的相似性为41.75%,与里氏木霉的相似度为37.40%、与灰葡萄孢的为38.97%;上述两个序列相应功能的研究,以及二者与目标基因间的关系,需要进一步完成全基因的克隆才能予以明确;实验过程中尝试应用过多对不同引物,显示双孢蘑菇纤维素酶系表达调控的相关基因存在一定的复杂性。