【摘 要】
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白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)是鱼类先天免疫系统的重要组成部分,在抵抗细菌和病毒入侵时发挥重要作用。为了解大黄鱼(Pseudosciaena crocea)白细胞介素10(interleuki
【机 构】
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宁波大学教育部应用海洋生物技术重点实验室;
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划)(2012AA10A403-4);浙江省重大科技专项(2016C02055-7)
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白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)是鱼类先天免疫系统的重要组成部分,在抵抗细菌和病毒入侵时发挥重要作用。为了解大黄鱼(Pseudosciaena crocea)白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)的序列特征、系统发育及与溶藻弧菌感染的相关性,我们采用RACE(rapid amplification of cDNA ends)-PCR法扩增大黄鱼IL-10 cDNA部分序列:采用荧光定量PCR检测各组织的表达差异。获得的儿-10基因cDNA部分序列,长899bp,含完整开放阅读框(555bp),编码1 84个氨基酸,具有构成两对二硫键的四个保守半胱氨酸。大黄鱼IL-10含有N端22个氨基酸的信号肽序列,以及IL-10家族特征序列。以15种脊椎动物的IL-10氨基酸序列构建系统进化树,显示大黄鱼IL-10和其他鱼类聚为一大支,在进化上与同属鲈形目的鲈鱼最近,其次是金头鲷和绿河豚;同源序列比对结果显示大黄鱼IL-10和鲈鱼相似度达78%,与金头鲷和绿河豚分别是76%和63%,符合传统分类学定义。荧光定量PCR(Real-time PCR,RT-PCR)检测结果显示,健康大黄鱼心、肝、脾、肾、鳃、脑、肌和肠等8个组织中IL-10均有表达,其中以鳃和肠表达量最高;溶藻弧菌(Vibrioalginolyticus)协迫后,肠、脑、脾、肝和肾等5个组织中IL-10基因表达量均显著高于对照组(P<0.05),其中肾中表达量变化最大,注射8h时为对照组的10.06倍;其次是肝组织,注射8h后为对照组的8.79倍。上述结果为进一步研究大黄鱼IL-10的免疫功能与机制提供了基础资料。
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