miRx调控水稻稻瘟病抗性和农艺性状

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microRNAs(miRNAs)是一类相对保守,长度为2025个碱基的非编码RNA,广泛存在于原核和真核生物中,可以在转录水平上切割靶mRNA或者在翻译水平阻止靶基因的翻译从而调控基因的表达,是真核生物生长发育和抗性的重要调控因子。ETMs(endogenous microRNA target mimic)是miRNAs的内源模拟靶标,通过诱捕对应的miRNAs抑制miRNAs对其靶基因的调控作用。到目前为止,关于miRNAs的报道已经很多,但是关于水稻miRNAs对稻瘟病抗性的研究较少。在实验室的前期工作中,通过高通量测序在正常情况下和受稻瘟菌侵染下的感病水稻株系LTH和抗病株系IRBLkm-Ts,筛选得到30余个在稻瘟菌侵染条件下表达量有显著变化的水稻miRNAs。其中,miRx在稻瘟病抗性中被预测为正调控因子。在miRx过量表达株系上,活体/离体接稻瘟菌后鉴定病斑,喷菌检测抗性基因转录水平,DAB染色鉴定H2O2累积,和TrypanBlue染色观察菌丝等一系列抗性检测实验证明,过量表达miRx增强了水稻对稻瘟病的抗性。另外,miRx过表达株系表现出明显的农艺性状改变,其分蘖角度变大,籽粒宽度增加,千粒重增加。为了进一步探究miRx对水稻稻瘟病抗性与农艺性状的调控机理,我们构建了miRx的内源模拟靶标(ETM)的过表达水稻材料。通过实时荧光定量PCR检测,证明在不同的株系中,miRx的靶基因表达显著高于对照材料,说明ETM有效消弱了miRx对靶基因转录的抑制。过表达ETM的植株在农艺性状上也发生了改变,表现为生长周期显著延长,结实率显著降低。同时,我们构建了miRx靶基因的过表达转基因植株和缺失突变体植株。下一步的实验将通过对mniRx靶基因过表达和沉默的转基因植株进行抗病性鉴定和发育表型分析,从而勾画miRx调控水稻稻瘟病抗性和农艺性状的初步图谱。
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