鉴定组织型转谷氨酰胺酶作为肺癌耐药合并转移的炎性分子标志物

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背景与目的:组织型转谷氨酰胺酶(tissue transglutaminase,tTG)可以通过调控TGF-β1、IL-6、TNF-α、IFN以及IL-13等与癌症的发生发展、纤维化及其他炎症性疾病相关,是重要的炎性分子,本研究旨在研究tTG在肺癌耐药合并转移中的作用。方法:对A549肺癌细胞株和耐受顺铂的A549肺癌细胞株(A549-cisplatinum-resistance,A549-CDDPR),用荧光定量PCR和Western Blot及细胞免疫荧光法检测上述肺癌细胞株tTG的表达水平;免疫组化检测人肺癌组织芯片tTG的表达;Transwell法(不加/加matrigel)分别检测肺癌细胞的迁移力和侵袭力;MTS法检测肺癌细胞的存活。用tTG小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)转染法调低tTG水平。结果:20×光学显微镜下A549、A549-CDDPR细胞迁移平均数分别为44.6±5.3个、229.67±27.34个,细胞侵袭平均数分别为55.33±5.96个、359.0±36.87个,P<0.05,差异有统计学意义。A549-CDDPR细胞的tTG水平明显高于A549,P<0.05,差异有统计学意义;人肺癌组织芯片免疫组化检测提示有淋巴结或远处转移患者的肺癌组织tTG阳性表达率为72.4%,高于无转移患者(阳性表达率37.6%),P<0.01,差异有显著统计学意义。tTG-siRNA下调A549-CDDPR细胞株tTG的表达后,细胞存活率为50.94±5.59%,而NC-siRNA转染A549-CDDPR细胞的存活率为92.60±5.32%,P<0.01,差异有显著统计学意义;200×光学显微镜下,NC-siRNA处理A549-CDDPR细胞株、tTG-siRNA转染A549-CDDPR细胞株平均迁移数分别为200.8±24.43个、103±13.10个,细胞平均侵袭数分别为337±22.2个、114.6±15.24个,P<0.05,差异有统计学意义。结论:A549顺铂耐药细胞株(A549-CDDPR)不仅耐受高浓度的顺铂而且具有高的迁移力和侵袭力;tTG表达水平与肺癌患者的转移发生呈正相关;A549-CDDPR细胞高表达tTG,而tTG-siRNA可以提高A549-CDDPR对顺铂的敏感性,并抑制其迁移力和侵袭力。因此tTG在肺癌的转移以及具有高迁移、侵袭能力的人肺癌细胞株的耐药中起重要作用,可作为肺癌耐药合并转移特别是转移的重要炎性分子标记物。
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