【摘 要】
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研究pcsk9基因沉默后对oxLDL诱导THP-1源性巨噬细胞凋亡的影响。分别用0、25、50、75、100μg/mL的oxLDL处理THP-1源性巨噬细胞48 h,Hoechst33258染色检测细胞凋亡,RT-PCR、W
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研究pcsk9基因沉默后对oxLDL诱导THP-1源性巨噬细胞凋亡的影响。分别用0、25、50、75、100μg/mL的oxLDL处理THP-1源性巨噬细胞48 h,Hoechst33258染色检测细胞凋亡,RT-PCR、Western blot分别检测pcsk9 mRNA、NARC-1蛋白质的表达。应用Lipofectamine2000转染三对pcsk9 siRNA进THP-1源性巨噬细胞中,6 h后荧光显微镜下观察转染效率,分别在转染24 h、48 h后从mRNA、蛋白水平观察pcsk9沉默效率,从而筛选出最有效的siRNA再转染THP-1源性巨噬细胞,转染24 h后加入oxLDL处理48 h,Hoechst33258染色观察细胞形态评价细胞凋亡,流式细胞计数检测细胞凋亡率。75μg/mL的oxLDL处理THP-1源性巨噬细胞48 h后,Hoechst33258染色可见大量的细胞核呈浓染致密的固缩形态或颗粒状荧光的凋亡细胞。同时RT-PCR、Western blot检测发现,随着oxLDL浓度的增加,pcsk9 mRNA和NARC-1蛋白质表达量均增加,75μg/mL oxLDL组增加最明显。荧光标记的siRNA转染细胞6 h后,成功转染的细胞可见绿色荧光散在分布在细胞质中,未转染的细胞未见荧光。以siRNA转染细胞24 h后,再用oxLDL处理48 h,Hoechst33258染色及流式细胞计数结果显示,转染siRNA组凋亡明显被抑制。oxLDL可呈浓度依赖性刺激pcsk9 mRNA和NARC-1蛋白的表达并使THP-1源性巨噬细胞凋亡明显增加;pcsk9 siRNA能有效抑制pcsk9基因的表达并能显著抑制oxLDL诱导的THP-1源性巨噬细胞的凋亡。
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