【摘 要】
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启动子是细胞基因表达转录过程中重要的调控元件,但乳酸菌组成型启动子相对较少,且不能提供广泛和连续的转录表达,亟待丰富乳酸菌启动子库。组成型启动子P23是目前已知的乳酸菌最强组成型启动子,本研究分别通过易错PCR和核苷酸诱变2种方法,对P23启动子进行随机突变构建启动子文库,以红色荧光蛋白作为报告蛋白,电转至嗜热链球菌S-3,通过96孔板结合酶标仪进行高通量筛选。以P23强度=1为对照,基于易错PC
【机 构】
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上海理工大学健康科学与工程学院上海食品微生物工程技术研究中心
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启动子是细胞基因表达转录过程中重要的调控元件,但乳酸菌组成型启动子相对较少,且不能提供广泛和连续的转录表达,亟待丰富乳酸菌启动子库。组成型启动子P23是目前已知的乳酸菌最强组成型启动子,本研究分别通过易错PCR和核苷酸诱变2种方法,对P23启动子进行随机突变构建启动子文库,以红色荧光蛋白作为报告蛋白,电转至嗜热链球菌S-3,通过96孔板结合酶标仪进行高通量筛选。以P23强度=1为对照,基于易错PCR的P23突变库启动子强度变化范围为0.01～3.35,碱基突变率为1.12%～3.35%。基于核苷酸诱变的P23突变库启动子强度为0.01～4.04,突变率接近20%,且大部分突变都是A,T→G,C,具有很强的碱基偏好性。本研究提供了一套强度差异显著的组成型调控元件库,为乳酸菌代谢工程改造和合成生物学应用奠定基础。
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