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2001年禽戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)被首次从患有肝炎脾大综合症的病鸡中分离获得,其主要导致鸡大肝大脾病或肝炎脾大综合征,引起鸡死淘率升高和产蛋量下降。禽HEV感染给养禽业造成严重经济损失,而且可能具有公共卫生学意义。禽HEV不稳定易降解,很难从载毒样品中分离得到,而且迄今为止也仍没有高效的体外细胞培养体系,这在一定程度上阻碍了对其抗原性、致病性及传染性等相关研究。禽HEV与人、猪HEV在抗原性和遗传性上具有一定的相关性并且禽HEV的ORF2蛋白与人和猪HEV的同源性为50%左右,据此我们假设:禽HEV的衣壳蛋白可能会像人、猪HEV的类似,通过杆状病毒表达系统表达可以自我组装成VLPs,并且VLPs能够模拟天然禽HEV颗粒的表面空间结构及病毒抗原性和对宿主细胞的吸附性等生物学活性。此外,我们前期利用生物信息学软件对国内外已在真核和原核表达系统成功获得病毒样颗粒的人源HEV毒株的氨基酸区段比对分析,发现禽HEV(CaHEV毒株)ORF2蛋白与其相对应的氨基酸区域分别为(56-554aa)和(313-549aa),同时利用三维结构预测数据库构建两段区段三维结构模型,验证其很有可能组装形成VLPs。对于真核表达系统:我们利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统(Invitrogen)构建获得包含上述潜在区段重组杆状病毒N55C52(56-554aa),分别以10 MOI接毒量感染昆虫细胞系sf9和Tn5,通过SDS-PAGE和Westem blot方法鉴定细胞培养上清中存在55kDa、53k)a和371kDa的单体蛋白。CsCl密度梯度离心在1.286g/cm~3左右存在白色条带,在Western blot检测中该条带复合物能与禽HEV单克隆抗体1B5特异性反应,说明该多聚体包含N55C52区段。而针对原核表达系统:我们利用大肠杆菌表达系统无融合标签表达p237蛋白(313-549aa),获得34kDa左右包涵体蛋白,将该包涵体蛋白透析复性液体进行液相色谱鉴定,在分离峰中存在大于400kDa多聚体峰带,Western blot鉴定该多聚体能与禽HEV单抗1B5特异性反应,推测p237蛋白可自我组成病毒样颗粒。本课题的研究为下一步利用纳米粒度仪及透射电镜观察鉴定上述两种复合物是否为禽HEV-VLPs,进而利用病毒颗粒研究禽HEV抗原性及免疫学生物学特性提供了材料支撑。