人钙联蛋白S100A8/S100A9原核载体的构建与表达

来源 :中国药理学会抗炎免疫药理专业委员会成立30周年纪念大会暨2012年学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:weiguoliaaaa
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  目的:构建人钙联蛋白S100A8/S100A9的原核表达载体并进行蛋白表达及纯化,以作进一步研究.方法:从人单核巨噬细胞THP-1中提取总RNA,进行RT-PCR,得到目的基因,与TA克隆载体PMD进行连接,得到PMD-S 100A8/S 100A9质粒,BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切产物或者PCR产物双酶切,与大肠杆菌PET-32A表达载体进行连接,得到PET-32A-S100A8/S100A9重组质粒.重组质粒转入E.coli BL21(DE3)表达菌进行蛋白表达.融合His-tag蛋白用Ni柱纯化,冷冻干燥,进行下一步研究。结果及结论:成功构建了TA克隆质粒PMD-S100A8/S100A9及阳性PET-32A-S100A8/S100A9重组质粒,成功诱导蛋白的原核表达,为进一步研究S100A8/S100A9钙联蛋白的结构和功能提供了基础。
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