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目的:制备表达a-Gal的肿瘤细胞与树突状细胞融合疫苗,研究其在体内外的抗肿瘤作用。方法:将含有a-1,3-GT基因的慢病毒转染到乳腺癌细胞MDA-MB-231中,Western blotting验证a-1,3-GT蛋白在细胞内的表达情况。植物凝集素GS-IB4与MDA-MB-231细胞孵育后,用流式细胞术检测其表面a-Gal的表达情况。用PEG制备肿瘤细胞MDA-MB-231(Gal~+)与树突状细胞融合疫苗,在显微镜下观察融合情况。流式细胞术分析融合细胞的表面分子CD80、CD86和MHC-II类分子的表达情况。用CFSE染色后的T细胞与融合细胞孵育,流式细胞术检测T细胞的荧光强度,计算T细胞的增殖指数。用抗人CD25和CD69的单克隆抗体与融合细胞刺激后的T细胞孵育,流式细胞术检测T细胞表面活化分子CD25和CD69的表达情况。融合细胞刺激后,流式细胞术检测T细胞对肿瘤细胞的杀伤情况,ELISA检测T细胞分泌的细胞因子IL-2和IFN-γ的水平。通过在SICD小鼠身上重建人免疫系统来研究融合细胞的体内抗肿瘤作用。观察小鼠生存期和肿瘤生长情况,并用流式细胞术检测外周血和肿瘤内的CD4~+和CD8~+T细胞百分率。ELISA检测血清中IL-12、IL-2、IFN-γ和总IgG水平。免疫组织化学检测小鼠肿瘤组织中肿瘤细胞的增殖和凋亡情况。结果:成功构建稳定表达a-Gal的肿瘤细胞系MDA-MB-231(Gal~+)。在PEG的诱导下,成功制备MDAMB-231(Gal~+)肿瘤细胞与树突状细胞融合疫苗MDA-MB-231(Gal~+)/DC。在体外,我们发现MDA-MB-231(Gal~+)/DC融合疫苗高表达CD80、CD86及MHC-II类分子等表面分子和细胞因子IL-12;并能促进T细胞的增殖活化,提高T细胞分泌IL-2和IFN-γ的水平;还能诱导高效细胞毒性淋巴细胞的产生,并且特异性杀伤乳腺癌细胞。在重建人免疫系统的SICD小鼠身上,MDA-MB-231(Gal~+)/DC融合疫苗治疗后的小鼠外周血和肿瘤内CD4~+和CD8~+T细胞百分率升高,血清中IL-12、IL-2、IFN-γ和总IgG分泌水平升高,肿瘤的增殖和生长受到抑制,肿瘤细胞凋亡数量增加,小鼠生存时间延长。结论:MDA-MB-231(Gal~+)/DC融合疫苗能产生高效的抗肿瘤作用。