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神秘果素是非洲植物神秘果果实中的一种能够改变人的味觉、将酸味变成甜味的变味蛋白,可用于糖尿病与肥胖病等病人的食品和辅助治疗糖尿病。神秘果果实小、产量低、神秘果素的含量很低,资源非常有限。从神秘果中提取神秘果素无法满足市场的需求。本研究从神秘果果实中克隆出神秘果素基因,转入大肠杆菌和紫心甘薯植物,探讨通过基因工程生产神秘果素的途径。已获得的主要结果如下:1.基因克隆。从神秘果果肉中提取总RNA,通过RT-PCR克隆到神秘果素基因。经测序等分析,与NCB1上登录的神秘果素基因序列一致。2.原核表达。神秘果素基因克隆到原核表达载体pQE30,构建表达质粒pQE30-MIR,转化E.coli M15中的表达。测定了转化菌株在不同温度下（37℃,28℃,16℃）,不同IPTG浓度和不同诱导时间等的蛋白表达,电泳分析表明原核表达蛋白大部分为包涵体形式。3.包涵体蛋白复性。原核表达蛋白经细胞破碎后获得包涵体,洗涤后溶解于含6 M尿素的包涵体溶解液中,4℃环境中进行尿素梯度透析复性（6 M→4 M→2 M→1 M→0 M）。电泳分析表明,复性后获得了一定量的二聚体蛋白,但复性后的蛋白无味觉改变活性。4.植物表达载体的构建。以CaMV35S为启动子,新霉素转移酶基因（NPTⅡ）为植物选择标记基因,将神秘果素基因克隆到pCanG植物表达载体。冻融法将构建的重组质粒pCanG-MIR导入根癌农杆菌LBA4404中,获得工程菌。5.紫心甘薯遗传转化。以甘薯茎段为外植体,去掉侧芽,置于0D600=0.4的含重组质粒pCanG-MIR的根癌农杆菌菌液中侵染20 min,共培养2 d后接种到芽诱导培养基上待其分化。在第一批获得25株再生苗中,有1株无性系经PCR检测为阳性。其它再生植株的鉴定及转基因植株的分析正在进行中。