【摘 要】
：
目的:利用CRISPR-Cas9基因靶向修饰技术结合胚胎显微注射技术构建β-地中海贫血家兔模型。方法:针对兔Hbb基因第二外显子设计两条gRNA靶位点,将Cas9和gRNAs体外转录为mRNA注
【机 构】
：
广东省产科重大疾病重点实验室广东省高等教育生殖与遗传重点实验室,广州医科大学附属第三医院;
论文部分内容阅读
目的:利用CRISPR-Cas9基因靶向修饰技术结合胚胎显微注射技术构建β-地中海贫血家兔模型。方法:针对兔Hbb基因第二外显子设计两条gRNA靶位点,将Cas9和gRNAs体外转录为mRNA注射入兔受精卵,移植代孕母兔后可获得Hbb基因敲除的β-地中海贫血家兔模型,对其进行基因型检测以及贫血表型评估。结果:体外胚胎注射Cas9(200ng)、gRNA1(20ng)、gRNA2(20ng)对gRNAs活性进行检测,共注射35个受精卵,其中17个发育至囊胚,经检测全部发生敲除,证明gRNA切割效率较高。将Cas9、gRNAs以相同的浓度注射入30个受精卵移植假孕母兔,在移植的10只母兔中,仅有3只怀孕并且全部流产,推测其原因是gRNA活性太高导致Hbb基因双敲致死。然后将Cas9(100ng)、gRNA1(10ng)、gRNA2(10ng)降低浓度注射入受精卵,移植后成功获得两只存活的Hbb基因敲除嵌合体家兔。连接T载体测序显示分别敲除7bp和10bp,血涂片显示均有大量的低色素性小细胞。结论:利用CRISPR-Cas9技术可以获得Hbb基因敲除的β-地贫家兔模型,对于血液类疾病的治疗和研究具有重要的应用价值。
其他文献
对书画装裱中绫绢材料的托染方法加以阐述,进一步理解绫绢材料在书画装裱中所起的重要辅料作用。
根据矿床的地质特征、成矿时代、成矿物质来源等方面的分析、研究，认为银厂铅锌矿属热水喷流沉积-后期改造矿床。
动态剪切实验是指剪切加载应变率处于102以上高应变率力学实验,本文回顾了近40年来高应变率剪切力学实验的发展现状,并重点研究了基于Hopkinson杆的高应变率剪切实验检测技术
水资源可持续利用是一个由水资源、社会经济和环境等子系统组成的复合系统，采用层次分析法确定各子系统相对水资源可持续利用总目标的权重，从而得到水资源可持续利用综合评价结
<正>本方法是在0.15~0.3mol/L柠檬酸介质中,加入催化剂将水样中亚硝酸根迅速分解成二氧化氮气体,用空气载入原子吸收分光光度计的测量系统中,测定该气体对来自锌空心阴极灯21
摘要：随着音乐艺术的发展，音乐教育在高校也受到了越来越多的重视，也得到了很大的发展。声乐教育普遍出现在高校课堂，但学生的积极性和主动性却没有想象中的高，为了提高学生的艺术修养，增强学生的综合素质，如何提高音乐教育的质量已经成为高校的一大亟待解决的问题。本文从培养高校声乐课堂教学的参与意识入手，分析了学生主动参与的其意义和措施。 关键词：声乐教学 意义 措施 随着教学的不断改革和创新，对于学生学
河南省新野县位于河南省西南、南阳盆地中心,城市规划区面积达94.1km2。评估区主要地质灾害类型为崩塌、地面沉降、地面不均匀沉陷、膨胀土变形及其产生的地裂缝灾害。在现状
简单回顾了采场顶板结构理论、顶板运动参数预测、采场支承压力分布规律和顶板运动监测预报研究的进展情况．并提出了今后采场矿压研究方向。