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目的 :CD59是一种细胞膜表面补体调节蛋白(Membranecomplement regulatory protein,mCRP),既能调控机体的补体系统,又能参与细胞信号的传导过程。在肿瘤表面通常高表达CD59,其帮助肿瘤细胞逃避机体补体的攻击以及促进肿瘤细胞的快速增殖。本研究通过CRISPR/Cas9系统敲除CD59,探讨其在Jurkat细胞增殖、凋亡、抗补体中的作用,揭示CD59在T-ALL中的发病机制,为临床诊断和治疗提供新的方向。方法 :利用病毒转染技术和CRISPR/Cas9技术转染Jurkat细胞,建立目的基因稳定表达的细胞株,设空白对照组、转染空载体病毒对照组、CD59高表达组、CD59敲除1/2/3组。荧光显微镜和流式细胞仪检测细胞绿色荧光的表达率;用激光共聚焦显微镜、Western blot和实时定量PCR检测CD59分子的表达水平及定位;台盼蓝及乳酸脱氢酶试验检测细胞的抗补体能力;凋亡试剂盒及CCK8试剂盒检测各组细胞的增殖凋亡;Western blot和实时定量PCR检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Survivin、Caspase-3的表达;ELISA试剂盒检测细胞培养上清中细胞因子IL-2、IL-3的表达。结果 :荧光显微镜观察到绿色荧光的表达,流式细胞仪检测各组细胞转染效率在90%,说明慢病毒的转染效率达到实验的要求。激光共聚焦显微镜观察罗丹明标记的CD59,发现定位于细胞膜上,敲除CD59基因后细胞膜上几乎看不到CD59的表达。与Jurkat组相比,CD59敲除组中CD59的表达明显下降,抗补体能力减弱,细胞增殖速度下降,凋亡细胞增多,凋亡抑制蛋白Bcl-2和Survivin的表达下降,凋亡促进蛋白Bax和Caspase-3的表达明显上升,CD59高表达组与Jurkat组相比,结果与CD59敲除3组相反;同时ELISA结果显示CD59敲除后IL-2和IL-3的表达水平下降。结论:CD59高表达促进细胞增殖,CD59的敲除可以增加补体介导的溶细胞作用以及诱导Jurkat细胞凋亡。