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研究目的:作者:徐伟峰,张善勇,陈旭卓颞下颌关节骨关节炎(Temporomandibular joint osteoarthritis, TMJOA)是一种常见的退行性关节病变,其病理特点主要包括进行性关节软骨退变、滑膜炎和软骨下骨硬化等。课题组根据前期预实验推测DLK2(delta drosophila homolog-like 2 or delta like 2 homologue)基因可能和颞下颌关节骨关节炎的发生发展有关,在此基础上,分析DLK2在软骨发育过程和颞下颌关节骨关节炎动物模型中的表达,以及过表达DLK2对ATDC5细胞增殖分化的影响,初步明确DLK2在软骨发育和颞下颌关节骨关节炎中的作用。研究方法:1.构建ATDC5-DLK2过表达细胞系,CCK-8、Real-time PCR分析DLK2对ATDC5细胞增殖分化中的影响; 2.通过在SD大鼠颞下颌关节腔内注射VEGF,构建颞下颌关节骨关节炎动物模型; 3.分析DLK2在颞下颌关节骨关节炎动物模型中的表达;在ATDC5细胞中过表达DLK2,分析DLK2对基质金属蛋白酶(Matrixmetalloproteinase, MMPs)以及聚蛋白多糖酶(A Disintegrin And Metalloproteinase with Thrombospondin Motifs,ADAMTSs)表达影响。研究结果:1.在ATDC5细胞正常诱导分化过程中,DLK2表达下降;过表达DLK2后,ATDC5细胞增殖速率明显提高,但ATDC5细胞成软骨标志物(Col2a1、Acan、Col10a1)的mRNA水平在分化过程中明显下降。2.甲苯胺蓝染色和番红O染色显示从第2周开始VEGF组髁突软骨基质丢失明显,并且软骨簇集增生和空泡现象也开始出现,到第8周时髁突软骨层基本丧失;改良Mankin评分显示VEGF组的得分从第2周开始明显高于空白对照组和生理盐水组的得分;免疫组织化学染色显示VEGF组的MMP9、MMP13表达明显比空白对照组和生理盐水组高;Tunel凋亡检测也发现在第1周和第2周VEGF组的髁突软骨细胞凋亡明显多于空白对照组和生理盐水组,这些结果提示颞下颌关节骨关节炎动物模型建立成功。3.DLK2在颞下颌关节骨关节炎动物模型的早期表达逐渐增高。并且在ATDC5细胞中转入外源DLK2后,基质蛋白酶MMP13和ADAMTS5蛋白的表达明显增高,而MMP9和ADAMTS4蛋白改变不明显。研究结论:DLK2可能和软骨发育以及颞下颌关节骨关节炎的发生发展有关,并且有可能成为治疗颞下颌关节骨关节炎疾病的一个潜在靶点。