Ora Verse(甲磺酸酚妥拉明注射液,0.4 mg/1.7ml/支)是首个开发用于加速消除含肾上腺素的牙科局部麻醉剂麻醉效应的制剂,在牙科麻醉反转治疗时应用广泛。但由于其在牙科麻醉反转治疗时局部用药剂量小(0.2、0.4和0.8 mg),血药浓度低,有关血药浓度测定报道文献[1,2]少,胡敏等采用LC-MS法测定人血浆中FTL浓度的最低定量限(LLOQ)仅为1 ng·mL-1。为测定甲磺酸酚妥拉明注射液健康人体药代/药效动力学试验样本血药浓度,本文以稳定性同位素标记药物做内标,建立了灵敏、准确的UPLC-MS/MS法测定血浆中酚妥拉明浓度分析方法,并已用于四川美大康华康药业有限公司和北京福瑞康正医药技术研究所研制的甲磺酸酚妥拉明注射液药动学研究,结果良好。采用美国Waters公司Acquity(ⅠClass)型超高效液相色谱仪,美国Waters公司Xevo TQ-S质谱仪;UNIFI工作软件(Version 1.6),ACQUITY UPLC BEH C18(2.1×50 mm,1.7μm)。流动相:A(水相):0.05%甲酸水,B(有机相):乙腈。流速:0.3 mL·min-1梯度洗脱,柱温:40℃;进样时间2.3min。取血浆样品200μL,加入50μL内标工作液(1 ng·mL-1),混匀后,再加入100μL 2.5%的氨水,加2.0 mL甲基叔丁基醚,涡旋混合5 min,低温离心5 min(3000 rpm,8℃),转移上层约1.6 mL有机相至尖底管中,40℃水浴通空气流挥干。残渣用50μL流动相复溶,进样2μL。采用ESI离子源,多反应离子监测(MRM),正离子模式扫描,以d4-酚妥拉明作内标,药物和内标的检测离子对(m/z)分别为282.2→212.2和286.2→212.2,CE 20 V,喷雾电压3.5 kV,干燥气温度450℃。妥拉明和内标d4-酚妥拉明的保留时间分别为1.1 min、1.1 min,血浆杂质不干扰FTL和d4-FTL出峰。FTL血浆样本测定在0.01～6.0 ng·mL-1范围内线性良好;高浓度样本进样后无残留;最低定量限(LLOQ,0.01 ng·mL-1)三批,批内精密度RSD在1.53～6.16%之间,偏差(或准确度)在-14.4%～1.7%范围内,批间精密度RSD为4.5%,偏差为4.5%;低浓度质控(QL,0.03 ng·mL-1)三批,批内精密度RSD在1.4%～5.8%之间,偏差在-14.5%～6.9%范围内,批间精密度RSD为5.4%,偏差为5.4%;中浓度质控(QM,0.48 ng·mL-1)三批,批内精密度RSD在0.7%～4.6%之间,偏差在-12.51%～7.7%范围内,批间精密度RSD为6.2%,偏差为6.3%;高浓度质控(QH,4.8 ng·mL-1)三批,批内精密度RSD在1.1%～4.6%之间,偏差在-15.8%～6.7%范围内,批间精密度RSD为1.5%,偏差为2.2%。6个不同来源空白血浆,QL、QH两个浓度血浆样本基质效应经内标校准后分别为99.0%和99.4%,其RSD分别为0.5%和0.4%;QL、QH两个浓度脂血血浆样本基质效应经内标校准后分别为100.1%和99.4%,其RSD分别为1.4%和1.1%;QL、QH两个浓度溶血血浆样本基质效应经内标校准后分别为105.2%和100.5%,其RSD分别为1.0%和0.7%;萃取回收率大于50%;血浆样本在-80℃冰箱冷冻保存47 d,反复冻融5次,在室温放置5 h,处理后的样本在进样室中放置7 h,萃取物室温放置29h,重复进样3次,与0时刻值比较RSD均<15%,血浆样品稀释2倍测定不影响测定结果。本法已用于16例健康受试者甲磺酸酚妥拉明注射液药动学研究样本测定,其低(0.2mg)、中(0.4mg)、高(0.8mg)剂量血药浓度均值药-时曲线见附图。结论本法特异性好,精密度高,准确度好,可用于酚妥拉明注射液人体药代动力学研究。