论文部分内容阅读
目的:1)初步探讨青风藤中提取的生物碱单体青藤碱(Sinomenine,SN)对佐剂性关节炎(AA) 大鼠滑膜细胞表达与分泌TNF-α、IL-1β、IL-10的影响,从NF-κB信号通路中相关环节来探讨其具体的作用机制及可能的量效关系。2)探讨SN在改善小鼠胶原性关节炎(CIA)关节症状、抑制体液免疫和细胞免疫方面与甲氨喋呤(MTX)的异同以及与MTX是否有叠加效应。3)探讨SN对类风湿关节炎(RA)患者血清中炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-10及抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP 抗体)的影响。方法:1)建立AA大鼠模型,获取腹腔巨噬细胞,从膝关节取滑膜组织并稳定培养滑膜细胞,提取细胞核蛋白及胞浆蛋白,RT-PCR检测TNF-αmRNA、IL-1β mRNA及IL-10mRNA 的表达,电泳迁移率改变分析法(EMSA)检测核转录因子NF-κB及AP-1的活性,Wertern blotting检测胞浆IκB-α的表达,激光共聚焦检测P65抗体的核转位情况。2)以CIA小鼠为研究对象,观察不同剂量SN和SN+MTX治疗后小鼠关节炎症的变化,ELISA法测定各组小鼠脾细胞分泌IFN-γ的水平和小鼠血清中抗Ⅱ型胶原抗体的水平。3)以健康成人为正常对照组,ELISA检测活动性RA患者予SN或MTX治疗前及治疗1月、2月时血清中TNF-α、IL-1β、IL-10的含量及抗CCP抗体的滴度。结果:1)SN下调巨噬细胞及滑膜细胞内TNF-αmRNA、IL-1βmRNA及IL-10mRNA的表达, 抑制NF-κB活性及IκB-α的降解,同时,SN可抑制P65的核转位,有一定的量效关系及相关性。2) 与正常对照组相比,RA患者血清中TNF-α、IL-1β含量明显增加(P<0．01),IL-10的含量无明显变化。SN及MTX能显著降低RA患者血清中IL-1β、TNF-α的含量(P<0．01),而对IL 10的含量及抗CCP抗体的滴度无明显作用(P>0．05)。3)大剂量或小剂量应用SN治疗CIA,其改善炎症症状、抑制IFN-γ和抗Ⅱ型胶原抗体的能力均不及经典抗风湿药物-MTX。但SN与MTX联合治疗CIA, 优于其他治疗方案。结论:SN可通过降低RA患者中血清TNF-α、IL-1β的含量而治疗RA。其机制之一在于SN可通过抑制NF-κB活性及IκB-α的降解而下调腹腔巨噬细胞及滑膜细胞内TNF-α mRNA、IL-1β mRNA的表达。大剂量或小剂量应用SN治疗CIA,其改善炎症症状、抑制IFN-γ和抗Ⅱ型胶原抗体的能力均不及经典抗风湿药物-MTX,但SN与MTX联合治疗CIA,优于其他治疗方案。因此,SN具有一定的免疫抑制效应,作为慢作用抗风湿药的辅助药物更为妥当。