骨质疏松症是一种慢性疾病,也是世界范围内的公众健康问题。在正常生理条件下,成骨细胞在骨骼发育和骨重塑过程中发挥重要作用。因此,研发具有提高骨强度、骨质量和逆转骨结构损伤能力促进骨形成的产(药)品正受到越来越多的关注。本文利用胰蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、复合蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶6种的商业酶酶解牦牛骨胶原蛋白,并对其蛋白酶解液促进成骨细胞增殖效果进行比较研究,最终选取中性蛋白酶为最适用酶。基于响应面法考查不同酶解条件变量对牦牛骨胶原蛋白制备促成骨细胞增殖活性肽的影响。采用基于单因素试验的Box-Behnken设计方法,优化水解时间、pH值、温度、酶对底物比值(E/S)4个独立因子。结果表明,酶解最佳条件:酶解时间为3.62 h,pH值为6.12,酶解温度为53.96℃,E/S为5637.01 U/g。在此条件下,酶解液可溶性多肽的试验测定值(含量)为0.5169 mg/mL,与模型预测值(0.5189 mg/mL)基本吻合。本研究将为功能性食品和制药工业中促成骨细胞增殖生物活性多肽的制备及应用提供相关理论和实践依据。