广西鸭源禽痘病毒的分离与鉴定

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引言禽痘(Avian pox)是由禽痘病毒(Avian poxvirus,APV)引起家禽、观赏鸟和野生鸟类的一种急性接触性传染病,目前已经发现其可自然感染大约9000种野禽和家禽中的232种。其典型临床特征是在禽无毛或少毛的皮肤上发生痘疹(皮肤型);或在禽口腔、咽喉部粘膜形成纤维素性坏死性痂膜(粘膜型),即所谓的"白喉"。与鸡、鸽、火鸡、麻雀等陆禽相比,鸭和鹅等水禽极少发生禽痘,鸭痘曾经在法国、荷兰、意大利、印度和加拿大的家鸭和德国番鸭发生过。目前主要在北美地区的麻鸭(mallard duck)、黑嘴天鹅(trumpeter swan)、北美斑鸭(mottled duck)、赤头鸭(red head duck)和蓝翅鸭(bhe-winged teal)等野生水禽中被发现,而整个东亚地区,包括东南亚和东北亚从未有从家鸭或者野生水禽分离到禽痘病毒的报道。2013年10月,我们首次从广西大新、田东和西林等3’县分离到同一种鸭源禽痘病毒(暂命名为MDUPV/(GX),并进行病毒的鉴定,为防控禽痘病毒在我国的流行传播提供理论依据。材料与方法采集发病鸭眼痘组织样品,经细菌学和真菌培养排除细菌感染后,通过电镜和病理组织学检查鉴定病毒。同时根据文献分别合成禽痘病毒P4b基因(fpv167)和DNA聚合酶基因(fpv094)特异性引物,分别扩增田东、大新和西林毒株的P4b基因和DNA聚合酶基因部分序列,用MEGA遗传进化分析软件绘制基于P4b基因部分序列(426bp)和DNA聚合酶基因部分序列(555bp)的遗传进化树。将皮肤痘疹病料研磨,按1:5制成悬液,经双抗处理后,采用人工气室法接种于11日龄SPF麻鸭胚绒毛尿囊膜。结果与讨论皮肤痘疹组织,研磨后取少量上清,经磷钨酸负染,在透射电镜下观察,可见330×280×200nm呈砖形的病毒粒子,且表面有不规则的管状结构,符合禽痘病毒粒子形态特征。进一步制备超薄切片在电镜下观察,可见典型的病毒包涵体。取皮肤痘疹组织制备组织切片,经HE染色,在显微镜下观察,发现病变部位有大量角质(棘)细胞增生、水肿、坏死和局部炎性细胞浸润,在许多病变细胞的胞浆中可见巨大、嗜酸性的、呈环状的胞浆包涵体(Bollinger氏小体),符合痘病毒感染的病理学特征。遗传进化结果表明,广西麻鸭毒株与北美野生水禽源禽痘病毒最为接近,属于A5亚群的一个独立新分支。鸭胚分离结果显示,部分鸭胚在接种部位附近的绒毛尿囊膜有灰白色的水肿隆起,且PCR检测病毒P4b基因为阳性。初步证实MDUPV/GX可以在麻鸭胚中增殖,但让需要继续传代使其充分适应。
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