植物RpsYu基因抗病抗逆功能研究

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植物具有多种生理生化机制抵抗生长环境中的病原微生物,而病原微生物为了成功侵染植物进化出效应因子抑制植物的抗病性,植物进而进化出抗病(R)基因监控并识别这些效应因子激发强烈的抗病反应。因此克隆作物R基因并了解其抗病机制是当今作物抗病育种的研究重点。本课题组前期构建了大豆根腐病抗病品种与感病品种的杂交群体,并通过图位克隆、精细定位和测序得到的C2H2锌指蛋白转录因子RpsYu基因,它是大豆中的一种新型R基因。本论文主要研究了RpsYu及其在拟南芥中的同源蛋白AtRpsYu在植物抗病、抗非生物逆境胁迫和生长发育中的功能。研究结果如下:1.RpsYu正调控大豆对大豆疫霉菌和丁香假单胞杆菌的抗性,且大豆RpsYu超表达植株接种大豆疫霉菌和丁香假单胞杆菌后病程相关基因PR1-08和PR1-15的转录水平显著高于非转基因对照植株。此外,RpsYu在大豆抗病过程中影响大豆叶片长度和宽度、株高以及叶绿素含量等生理指标。2.RpsYu超表达拟南芥植株与Col-0野生型对照植株表型差异明显,RpsYu超表达植株的中心叶片卷曲并且表皮毛增多。RpsYu正调控拟南芥对非生物胁迫的抗性,包括提高了拟南芥的干旱耐受性和高盐耐受性。经Real-time PCR检测,RpsYu超表达拟南芥植株体内耐盐胁迫信号标志基因AtSOS1、AtSOS2和抗旱相关基因AtRD29A的转录水平显著高于野生型对照拟南芥,与其耐盐、抗旱表型相符。3.RpsYu正调控拟南芥对丁香假单胞杆菌Pseudomonas syringae pv.tomato DC3000的抗性。RpsYu超表达拟南芥植株接种Pst.DC3000后较Col-0野生型对照植株症状更轻,且叶片内病原菌数量比对照植株少,在接种后RpsYu超表达拟南芥植株体内病程相关基因AtPR1和AtPR2较Col-0野生型对照植株转录水平更高。4.通过拟南芥器官特异性表达分析发现,拟南芥AtRpsYu基因在叶部表达量最高,根部表达量最低。拟南芥atrpsyu突变体植株较Col-0野生型植株表现出发育迟缓的症状,且叶片细小。对比Col-0野生型植株,atrpsyu突变体植株对非生物胁迫更为敏感,在高盐、干旱胁迫下生长受到抑制,存活率降低。此外,atrpsyu突变体植株体内耐盐胁迫信号标志基因AtSOS1和抗旱相关基因AtRD29A的转录水平明显低于Col-0野生型植株,证明AtRpsYu正调控植物的抗逆性。5.atrpsyu突变体植株和Col-0野生型植株接种番茄灰霉菌Botrytis cinerea后,观察到atrpsyu突变体植株较Col-0野生型植株更感病,叶片病斑直径更长。经检测,atrpsyu突变体植株体内抗病相关基因PDF1.2上升趋势不如Col-0野生型植株明显,番茄灰霉病菌体内的标志基因Actin表达量更高,说明AtRpsYu正调控拟南芥对番茄灰霉菌的抗性。
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