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目的:侵袭、转移是肿瘤的重要标志,也是癌症的主要死亡原因。因此,肺癌发生、转移机制及相应的治疗研究是现代肿瘤研究的一个重要方向。大量研究表明,肿瘤细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程在肿瘤侵袭、转移中发挥重要作用。岩藻黄素是存在于海藻中的一种类胡萝卜素,已被证实具有抗肿瘤作用。本实验以人肺腺癌细胞、肺腺癌及癌旁组织为研究对象,通过研究岩藻黄素在人肺腺癌细胞增殖、上皮间质转化及迁移中的作用,明确岩藻黄素对肺腺癌发生、发展的影响,并进一步探索其可能的作用机制,期望为肺癌的治疗提供参考。 方法:1.选取人肺腺癌A549细胞系。 2.CCK-8法观察岩藻黄素对肺癌A549细胞的增殖抑制作用。 3.TGF-β1诱导肺癌A549细胞发生EMT,Western Blotting方法检测在TGF-β1和/或岩藻黄素作用下,肺癌A549细胞EMT标志蛋白E-cadherin、Vimentin及Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin表达情况。 4.划痕实验检测在TGF-β1和/或岩藻黄素作用下,肺癌A549细胞迁移能力。 5.人肺癌组织及临床资料的收集:研究对象为于2018年10月至2019年1月于大连医科大学附属第二医院胸外科接受手术治疗,病理证实为肺腺癌的患者。共收集38例患者术后的肺癌及配对癌旁组织标本。患者平均年龄为61.36±8.93岁。男性患者16例,女性患者22例。临床分期均为Ⅰ-Ⅱ期。其中低分化病例数为4例,中/高分化病例数为34例。组织大小<3cm病例数为30例,组织大小≥3cm病例数为8例。 6.免疫组化方法,检测38对肺腺癌患者组织标本中Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin表达情况。 7.统计方法:采用SPSS23.0软件分析数据。单因素方差分析(one-way ANOVA)分析不同组别中各蛋白表达情况及细胞迁移距离的差异性。卡方检验分析组织中β-catenin的表达与各临床特征之间的关系。 结果:1.CCK-8实验结果显示:岩藻黄素可抑制肺癌A549细胞的增殖,并在一定范围内具有时间和浓度依赖性。 2.Western Blotting实验结果显示,TGF-β1作用于A549细胞后,E-cadherin蛋白表达减少,而Vimentin蛋白表达增加;同时,Wnt/β-catenin通路蛋白β-catenin表达增加,差异有统计学意义(p<0.05)。与单用TGF-β1组相比,岩藻黄素和TGF-β1共同作用可使E-cadherin蛋白表达增加,Vimentin蛋白表达减低,β-catenin表达减低,差异有统计学意义(p<0.05)。 3.划痕实验结果表明,TGF-β1显著增强A549细胞的迁移能力。与TGF-β1组相比较,岩藻黄素与TGF-β1共同作用可以明显减少细胞的迁移距离(p<0.05)。 4.免疫组化实验结果表明,癌组织中β-catenin高表达率高于癌旁组织(p<0.05)。在癌组织中,β-catenin主要异常表达在细胞质和/或细胞核,而在癌旁组织中,β-catenin主要表达在细胞膜(p<0.05)。 结果提示,β-catenin的表达与性别、年龄、肿瘤大小及分化程度无关(p>0.05)。 结论:岩藻黄素抑制A549细胞细胞增殖、EMT及细胞迁移,其机制可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来实现的;且在早期肺腺癌组织中发现β-catenin异常表达。