人骨形态发生蛋白-7(BMP-7)成熟肽编码序列的克隆与表达

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骨形态发生蛋白-7(BMP-7)又称为成骨蛋白-1(OP-1)属于转化生长因子-β(TGF-β)超家族。BMP-7是由431个氨基酸组成的糖蛋白,其信号肽和前结构域分别有29个和263个氨基酸,在Arg-292与Ser-293之间断裂后,释放出由139个氨基酸组成的成熟肽,体内以同二聚体的方式来完成其生物学功能。在组织水平,BMP-7成熟肽与Ⅰ型胶原蛋白缓释体移入骨干缺损部位后,能够促进新骨生成,显示出应用于骨、关节及软骨缺陷修复的良好前景。在细胞水平,BMP-7成熟肽可以促进成骨细胞与软骨细胞分化。除此之外,BMP-7在胚胎发育、器官发生与功能形成过程中起到了重要的调节作用。因此,利用基因工程的方法生产BMP-7成熟肽不仅可以服务于基础研究,而且具有很好的临床应用价值。 扩增出BMP-7成熟肽编码序列片段(877bp-1293bp),此片段经BamHⅠ、PstⅠ酶切处理后定向克隆入表达载体pQE30。重组表达载体pQE30/BMP-7转化入大肠杆菌M15[pREP4]中进行诱导表达。6xHis-BMP-7融合蛋白分子量为16.78kD,主要以包涵体形式存在,可被人BMP-7多克隆抗体识别。经表达条件优化后,该融合蛋白占菌体总蛋白的41.95%。在变性条件下,通过Ni-NTA金属螯合亲合层析柱对表达产物进行初步纯化,再经梯度透析进行复性,得到该融合蛋白的纯品,产量约为58.8mg/L培养基。该融合蛋白能够使人成骨肉瘤细胞系MG63细胞中的碱性磷酸酶活性升高,且呈剂量依赖性关系。证实该重组融合蛋白在体外具有BMP-7生物学活性。
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