几种核酸荧光探针的研究及应用

来源 :福州大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:wangjie198811
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DNA是生物体主要的遗传物质,有关DNA的研究是揭示生物遗传奥秘的基础。DNA的研究通常包括:对生物样品中DNA的含量进行测定,确定DNA结构和碱基对序列,研究环境中污染物质对DNA损伤机理以及研究抗癌药物与DNA作用方式并进行抗癌药物的筛选等等许多方面。在这些领域中,常使用的分析方法就是利用合适的荧光探针与DNA相互作用,以达到不同的研究目的。于是,本论文将重点放在了寻求某些能够对生物样品中DNA含量进行测定的荧光探针,希望在此基础上找到一种好的荧光探针用于对DNA的更深层次的研究,如确定结构和碱基对序列,以及探测病毒或受损伤的DNA。围绕这一目的,本论文主要进行了以下三方面的研究工作:一、研究染料探针没食子兰在小牛胸腺脱氧核糖核酸(ctDNA)定量测定方面的应用,建立了一种用没食子兰作为荧光探针测定ctDNA的方法。在加入ctDNA前后体系的荧光增强值与ctDNA的浓度分别在低浓度区间(0.05~1mg/L)和稍高浓度区间(1~10mg/L)呈较好的线性关系,并且检测限可达0.014mg/L。并作了合成样品和实际样品的测定,效果较好。同时对没食子兰与DNA的相互作用机理也进行了初步的探讨。 二、研究了ctDNA,fsDNA,yRNA,ssDNA对强荧光物质9-甲基吖啶荧光的猝灭作用,并据此建立了定量分析四种核酸的方法。线性范围分别为0.0~2.5 mg/L (fsDNA),0.1~3.0 mg/L (ssDNA),0.0~2.5 mg/L(ctDNA),0.1~3.0 mg/L(yRNA);检出限分别为0.027mg/L (fsDNA),0.033mg/L (ssDNA),0.042mg/L (ctDNA),0.053mg/L(yRNA)。用于合成样品和实际样品的检测,效果较好。三、在自行合成的一种新的镍配合物Ni(Phen)2PHPIP·(ClO4)2(PHPIP=对羟基苯基咪唑并[f] 邻菲咯啉)的基础上,研究其与DNA的作用方式。建立了一种测定微量fsDNA和ctDNA的荧光分析体系。研究中分别以荧光强度增强值ΔF对fsDNA(0.01mg/L~0.3mg/L和 0.3mg/L~5mg/L浓度区间),ctDNA(0.01mg/L~0.5mg/L和 0.5mg/L~5mg/L浓度区间)拟合工作曲线,检测限分别为0.0047mg/L(fsDNA),<WP=5>0.011mg/L(ctDNA),用于实际样品的回收率实验,效果良好。最后一章对论文内容进行了总结:三种测定核酸的体系与已经报道的其他测定核酸的体系比较,有较好的一面,具体表现为:检出限较低,线性范围较宽。
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