肝细胞生长因子与增生性玻璃体视网膜病变的研究

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目的:探讨肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor, HGF)与视网膜脱离(Retinal Detachment, RD)和/或伴有增生性玻璃体视网膜病变(Proliferative Vitreoretinopathy, PVR)的关系,进一步研究HGF对培养的人视网膜色素上皮(Retinal Pigment Epithelium, RPE)细胞形态、增生及损伤愈合的影响,初步阐明PVR病理过程中HGF的作用机理。 方法:同时收集34例视网膜脱离患者血清、玻璃体液标本,酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测HGF含量;10例严重PVR患者行玻璃体手术时取出视网膜前膜(Epiretinal membrane, ERM),透射电镜观察其组成成分,免疫组化染色观察HGF受体/c-Met的表达。体外培养人RPE细胞,相差显微镜观察细胞形态变化,MTT比色法检测RPE细胞的增生情况,细胞划线法检测迁移情况。免疫细胞化学方法观察细胞角蛋白、波形蛋白、成纤维细胞特异性蛋白-1(Fibroblast specific protein, Fsp-1)、HGF及其受体c-Met蛋白的表达。Western Blot方法检测Fsp-1、细胞角蛋白和E-cadherin的表达。所有指标mRNA水平均用RT-PCR方法检测。透射和扫描电镜观察HGF对RPE细胞单层细胞连接的影响。 结果:视网膜脱离和/或PVR患者血清HGF浓度明显比玻璃体液浓度低,二者无相关性;随着PVR程度加重,玻璃体内HGF浓度逐渐升高,但在C级和D级之间无统计学差异。ERM以上皮样细胞、成纤维样细胞为主并含有大量胶原纤维;HGF受体多在含色素颗粒细胞表达。体外培养的人RPE细胞角蛋白、HGF及其受体c-Met蛋白、波形蛋白表达阳性。正常人RPE细胞表达HGF及其受体c-Met、Fsp-1、TGF-β2mRNA,外源性HGF刺激后RPE细胞向成纤维样形态转化、细胞间连接破坏、促细胞迁移和增生,同时伴有Fsp-1、TGF-β2mRNA表达增强,细胞角蛋白和E-cadherin蛋白表达减弱。 结论:RPE细胞的自分泌作用可能是视网膜脱离后眼内HGF的主要来源。HGF改变了RPE细胞之间连接的完整性,促细胞增生、迁移,促细胞表型向成纤维细胞表型转化,提示HGF在RPE细胞活化中起重要作用,是参与PVR病理过程的一个重要因子。转化生长因子-β2可能是HGF生理性的拮抗剂。
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