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化学发光酶免疫分析(Chemiluminescence enzyme immunoassay, CLEIA)具有高灵敏度、高特异性、操作简便、成本低等特点,已成功应用于医学领域。三唑磷农药作为广谱杀虫剂,被广泛使用,因此建立高效、简便、快速、安全的农药残留检测方法具有非常重要的现实意义。本研究以三唑磷为典型的目标物,开展三唑磷农药残留CLEIA方法研究。主要研究内容及结果如下：(1)Luminol-H2O2-HRP化学发光增强规律及稳定性研究。研究内容包括增强剂和优良有机溶剂的选择；Tris-HCl buffer、HRP、增强剂、H2O2及Luminol等因素对化学发光强度及稳定性的影响；以发光强度和发光稳定性为评价指标,建立一种发光强度高、稳定时间长的Luminol-H2O2-HRP发光体系。结果显示,Tris-HC1buffer、增强剂、H202及Luminol等对发光稳定性影响较小；HRP对发光稳定性影响较大。在不同的HRP浓度范围,应选择不同的增强剂。选择的最优条件如下：当HRP浓度在0-6ng/mL时,选择4-咪唑-1基苯酚(4-IMP)为增强剂,DMF、H2O2、Luminol及4-IMP浓度分别为0.2%、2mM、0.63mM及1mM时,该体系的化学发光强度最高；当HRP浓度在6-25ng/mL时,选择4-溴苯酚(4-BOP)为增强剂,DMF、H2O2、 Luminol及4-IMP浓度分别为3.2%、4mM、0.63mM及0.25mM时,该体系的化学发光强度最高；当HRP浓度在25～80ng/mL时,选择4-羟基-4-碘联苯(HIOP)为增强剂,DMF、H2O2、 Luminol及4-IMP浓度分别为3.2%、4mM、0.63Mm及1mM时,该体系化学发光强度最高。(2)三唑磷农药残留CLEIA方法的建立。通过棋盘法确定直接竞争CLEIA法抗体和酶标半抗原的最适工作浓度,选4-(-1-基)-咪唑苯酚(4-IMP)为增强剂,运用L2s(56)正交设计实验优化增敏液配方,建立了农产品中三唑磷农药残留的化学发光酶免疫分析方法。结果显示：抗体包被浓度为2μg/mL,酶标半抗原浓度0.006μg/mL。增敏液优化配方为：6.4%DMF,0.01M pH9.0Tris-HCL缓冲液,0.6mM鲁米诺,2mM H2O2,1mM4-IMMp。在此基础上建立的方法灵敏度0.448μg/kg,标准曲线相关系数为0.9964,线性范围IC10～IC80:0.08μg/kg-20.00μg/kg。该方法能实现对苹果、节瓜、大米,柑橘,荔枝及甘蓝等样品的三唑磷残留快速、灵敏检测,添加回收率在82.8%～118.4%,与GC-MS法相关性R2=0.9312。(3)农产品中CLEIA快速筛查分析方法应用研究。根据我国规定的不同作物上的三唑磷农药最大残留限量(MRL值),选择具代表性的苹果、柑橘、卷心菜、节瓜、稻米为样品基质,进行了加标回收试验,每种样品重复检测100次,得到校正因子(f)。采用GC-MS检测实际样品中的三唑磷含量,确证阴性样品与阳性样品,进一步用CLEIA检测出样品三唑磷含量,经校正因子校正后计算出假阳性率及假阴性率。结果显示：苹果、柑橘、卷心菜、节瓜、稻米CLEIA检测法的校正因子分别是0.79、0.66、0.85、0.76、0.91。运用GC-MS和CLEIA同时检测1500个实际样品中三唑磷含量,经GC-MS确认,在1500份实际样品中,有1462份阴性样品及38份阳性样品。将CLEIA检测结果确证结果比较,在CLEIA检测数据中,确证的1462份阴性样品中出现假阳性样品2份,无假阴性数据。结果表明,CLEIA方法的假阳性率为0.13%,假阴性率为0。因此,本研究建立的三唑磷化学发光免疫分析方法可运用于农产品中三唑磷的快速筛查。