研究背景:黄曲霉毒素B1(Aflatoxins B1;AFB1)是广泛存在于畜禽饲料和谷物中的霉菌毒素。AFB1具有很强的肝毒性,且其含量高、分布广,严重威胁着人畜健康和食品安全,给农业、畜牧业带来了巨大的经济损失。因此,寻找降低AFB1对机体毒性作用的物质与作用机制有非常重要的生产实践意义。有研究表明,解淀粉芽孢杆菌可以提高机体的抗氧化能力、提高动物的生产性能、调节宿主肠道屏障功能等益生特性,其孢子稳定且便于运输。但解淀粉芽孢杆菌B10是否能缓解AFB1的毒性作用及其作用机制需要进行确证。研究的目的:探究解淀粉芽孢杆菌B10是否能对AFB1诱导的小鼠肝脏氧化损伤起到保护作用及其机制。试验方法:本试验选择5-6周龄的SPF级昆明小鼠(n=40),随机分为四组,每组10只,分别为:Control组、AFB1组、B10菌株组和AFB1+B10组。平静饲养一周后,连续灌胃28 d。试验期间记录小鼠每天体重。试验结束后,采用颈椎脱臼法处死小鼠,并收集血液。记录肝脏重量,计算各组小鼠肝脏脏器系数;检测血清和肝脏组织中AST、ALT的含量;检测肝脏组织中ROS含量、MDA含量和抗氧化指标GSH-PX、CAT、T-AOC、SOD的变化;HE切片观察各组小鼠肝脏细胞形态;Tunel法检测细胞凋亡的情况;q RT-PCR方法检测肝脏组织中内质网应激凋亡通路的CHOP、JNK、Bip、Caspase-3、Caspase-9、Caspase-12、Bax、Bcl-2基因m RNA的表达量;免疫印迹技术检测凋亡通路Bax、Caspase-3和Bcl-2蛋白水平的表达量。试验结果:(1)在AFB1+B10组中,解淀粉芽孢杆菌B10的添加改善了由AFB1引起的小鼠肝脏系数的升高。(2)在AFB1+B10组中,解淀粉芽孢杆菌B10的添加降低了由AFB1引起的小鼠肝脏组织与血清中ALT、AST含量的升高。(3)在AFB1+B10组中,解淀粉芽孢杆菌B10的添加降低了由AFB1导致的ROS升高、脂质过氧化MDA含量的升高、组织抗氧化酶SOD、GSH-Px、CAT活性和T-AOC含量的降低,进而对AFB1诱导的小鼠肝脏氧化损伤起到保护作用。(4)HE染色结果表明,在AFB1+B10组中,解淀粉芽孢杆菌B10的添加可使AFB1组的坏死、变性等现象得到了明显的改善。(5)在Tunel荧光染色检测细胞凋亡结果中,解淀粉芽孢杆菌B10的添加可以降低AFB1诱导的小鼠肝脏细胞凋亡,本次试验结果表明解淀粉芽孢杆菌B10可对AFB1诱导的小鼠肝脏细胞凋亡起到保护作用。(6)qRT-PCR分析结果表明,AFB1暴露使内质网应激通路中关键调控因子Bip升高,同时还提高了凋亡通路JNK、CHOP、Caspase-3、Caspase-9、Caspase-12、Bax相关m RNA的表达量,降低Bcl-2的m RNA表达量,解淀粉芽孢杆菌B10的给予逆转了这些基因在肝脏组织中的异常表达。WB检测结果显示,AFB1使凋亡通路Caspase-3、Bax蛋白的表达量升高,Bcl-2的蛋白表达量降低,而给予解淀粉芽孢杆菌B10逆转了这些蛋白在肝脏组织中的异常表达。本次试验结果表明解淀粉芽孢杆菌B10可通过调控内质网应激凋亡通路拮抗AFB1诱导的小鼠肝脏损伤。结论:解淀粉芽孢杆菌B10能通过抑制内质网应激信号通路拮抗由AFB1诱导的小鼠肝脏的氧化损伤和细胞凋亡。