论文部分内容阅读
宫颈癌是女性第二大常见恶性肿瘤,死亡率居女性恶性肿瘤第三位,其中约90%的宫颈癌死亡发生在发展中国家.宫颈癌筛查的普及和人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)疫苗的使用,使宫颈癌成为可预防的恶性肿瘤.但是HPV和细胞学筛查仍存在较大的漏诊风险,宫颈癌缺乏精准的早期筛查标志物.因此,寻找能够有效识别宫颈癌及其癌前病变的特异性分子标志物,补充目前宫颈癌早期筛查方法的不足,具有重要意义.研究表明DNA甲基化是恶性肿瘤发生的早期事件,且与宫颈癌的发生发展密切相关,可作为宫颈癌早期诊断的特异性分子标志,应用DNA甲基化检测技术能提高宫颈癌早期诊断的检出率.具有序列相似性的19家族(趋化因子(C-Cmotif)-样)成员A4(family with sequence similarity19member A4,FAM19A4)是TAFA基因家族成员,国外已有研究发现FAM19A4基因启动子甲基化能有效识别宫颈癌及其癌前病变,有望成为新型肿瘤标记物.但国内外目前尚无文献报道FAM19A4基因启动子甲基化与中国妇女宫颈疾病相关性的研究,也无FAM19A4基因启动子甲基化与宫颈癌临床病理特征及HPV感染型别相关性的研究.为探讨FAM19A4基因启动子甲基化在我国妇女宫颈癌及其癌前病变诊断中的价值,在国外研究基础上,本文采用双探针荧光定量PCR(Taqman probe-based quantitative PCR,qPCR)技术,从宫颈石蜡包埋组织(formalin-fixed and parrffin-embedded,FFPE)和hr-HPV阳性患者的宫颈细胞刷液两种标本中,检测不同宫颈疾病中FAM19A4基因启动子甲基化情况,并比较该基因甲基化在宫颈癌的不同临床病理特征和不同HPV型别中的差异,分析该基因甲基化在宫颈癌及其癌前病变中的诊断价值. 第一部分 FAM19A4基因启动子甲基化检测在宫颈癌及其癌前病变组织中的临床意义 目的： 检测宫颈癌、宫颈癌前病变及正常宫颈/宫颈炎的FFPE标本中,FAM19A4基因启动子甲基化的表达情况,并探讨FAM19A4甲基化对宫颈癌及其癌前病变的诊断价值. 方法： 分别随机选取31例、22例及23例经病理确诊为宫颈癌、宫颈HSIL(CINⅢ)及正常宫颈/宫颈炎的FFPE标本,采用qPCR技术分别检测三组FFPE标本中FAM19A4基因启动子甲基化的表达情况,并采用SPSS23.0软件进行统计学分析,评估该基因甲基化在宫颈癌及其癌前病变诊断中的价值. 结果： 1.FAM19A4基因甲基化检出率在正常宫颈/宫颈炎、宫颈HSIL及宫颈癌的FFPE标本中分别为8.70%(2/23)、72.73%(16/22)和96.77%(30/31),三组间甲基化检出率存在统计学差异(P<0.05),且随着宫颈病变严重程度增加,FAM19A4甲基化的检出率逐渐升高(Cochran-Armitage趋势检验,P<0.05). 2.三组样本卡方检验后的两两比较分析显示,宫颈癌组的FAM19A4基因启动子甲基化阳性检出率高于宫颈HSIL组(96.77%vs72.73%,P<0.05);宫颈癌组的FAM19A4基因启动子甲基化阳性检出率高于正常宫颈/宫颈炎组(96.77%vs8.70%,P<0.05);及宫颈HSIL组的FAM19A4基因甲基化检出率也高于正常宫颈/宫颈炎组(72.72%vs8.70%,P<0.05). 3.FAM19A4基因启动子的甲基化检出情况,在宫颈癌不同年龄段、不同病理类型、不同临床分期、不同肿瘤大小及不同淋巴结转移状态中的差异均无统计学意义(P>0.05). 结论： FAM19A4基因可能是宫颈细胞癌变的特异性分子标志物.从正常宫颈到癌前病变再向浸润癌的进展过程中,FAM19A4基因启动子甲基化检出率逐渐升高,提示该基因甲基化可能在宫颈癌的发生发展中起着一定作用. 第二部分 hr-HPV阳性宫颈细胞刷液中FAM19A4基因启动子甲基化检测在宫颈癌及其癌前病变诊断中的临床意义 目的： 检测高危型HPV(high-risk types of human papillomavirus,hr-HPV)阳性患者的宫颈细胞刷液中,FAM19A4基因启动子甲基化在不同宫颈疾病中的表达情况,探索AM19A4甲基化与宫颈癌临床病理特征及HPV感染型别的相关性,及比较该基因甲基化与细胞学、HPV16/18分型在宫颈癌及其癌前病变诊断中的差异和价值. 方法： 选取264例hr-HPV阳性(包括HP16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,66和68)患者的宫颈细胞刷液,经2位以上病理医师确定组织学诊断分别为宫颈癌72例、宫颈HSIL70例、宫颈LSIL45例及正常宫颈/宫颈炎77例,采用qPCR技术分别检测五组不同宫颈疾病的细胞刷液中,FAM19A4基因启动子甲基化的表达情况,并采用SPSS23.0软件进行统计学分析.检测FAM19A4甲基化表达在不同临床病理特征的宫颈癌及不同HPV感染型别中的差异.同时比较HPV16/18分型、细胞学检测和FAM19A4甲基化三种方法,在检测HSIL以上病变(≥HSIL/HSIL+)时的灵敏度、特异度、阳性预测值(Positive predictive value,PPV)、阴性预测值(Negative predictive value,NPV)及约登指数(Youdens index,YI)的差异,评估该基因甲基化在宫颈癌及其癌前病变早期诊断中的价值. 结果： 1.FAM19A4基因启动子甲基化检出率分别为:正常宫颈/宫颈炎组9.09%(7/77)、宫颈LSIL组24.44%(11/45)、宫颈HSIL组58.57%(41/70)及宫颈癌组94.44%(68/72),四组别间差异具有统计学意义(P<0.05),且随着宫颈病变严重程度增加,FAM19A4甲基化的检出率逐渐升高(Cochran-Armitage趋势检验,P<0.05). 2.五组卡方检验后的两两比较分析显示,任意两组别间的FAM19A4基因启动子甲基化检出率的差异均有统计学意义(P<0.05). 3.与正常宫颈/宫颈炎组相比,宫颈癌、宫颈HSIL及宫颈LSIL组中FAM19A4基因启动子甲基化检出率的OR值分别170.00(95%CI:47.60-607.16)、14.138(95%CI:5.685-35.156)、3.24(95%CI:1.15-9.08),均有统计学意义. 4.72例hr-HPV阳性宫颈癌细胞刷液中,FAM19A4基因启动子的甲基化检出情况,在宫颈癌不同年龄段、不同病理类型、不同临床分期、不同肿瘤大小、和不同淋巴结转移状态中均无统计学差异(P>0.05). 5.不同HPV分型与FAM19A4基因启动子甲基化检出率间存在相关性(P<0.05).在所有hr-HPV阳性患者的宫颈细胞刷液中,FAM19A4基因启动子甲基化检出率在HPV16/18感染组别中高于非HPV16/18感染组(66.15%vs30.60%,P<0.05).在非癌变的hr-HPV阳性宫颈细胞刷液中,FAM19A4基因启动子甲基化检出率在HPV16/18感染组别中仍高于非HPV16/18感染组(43.84%vs22.69%,P<0.05). 6.FAM19A4基因启动子甲基化在检测≥宫颈HSIL病变时的灵敏度稍低于HPV16/18分型联合细胞学检测(85.84%vs93.81%),但特异度、PPV、NPV及YI均高于联合检测.与单独FAM19A4甲基化检测相比,FAM19A4甲基化联合HPV16/18分型检测后,在检测≥宫颈HSIL病变时的灵敏度和NPV均稍增高,但特异度、PPV及YI均明显下降. 结论： 1.hr-HPV阳性细胞刷液中,FAM19A4基因可能是宫颈癌的特异性肿瘤标记物.随着宫颈病变进展,FAM19A4基因甲基化检出率逐渐升高,表明该基因甲基化可能与宫颈癌的发生发展密切相关. 2.与传统HPV分型和细胞学检查相比,FAM19A4基因启动子甲基化在诊断≥宫颈HSIL病变时具有优势,FAM19A4甲基化能提高宫颈癌及其癌前病变检出的准确率,有望成为宫颈癌诊断的一种辅助手段.