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目的:动脉粥样硬化的主要特征之一是血管平滑肌的异常增殖。研究发现Apelin/APJ系统在动脉粥样硬化、高血压等疾病中起重要作用。本实验室前期研究发现线粒体自噬途径和Warburg效应均可介导Apelin-13促HA-VSMCs增殖。本课题主要研究线粒体自噬是否引起铁超载进而调控Warburg效应从而介导Apelin-13促HA-VSMCs增殖,揭示线粒体自噬-铁超载-Warburg效应介导Apelin-13/APJ系统促HA-VSMCs增殖的新的分子机理。方法:1.Western Blot:检测HA-VSMCs中PKM2,LDHA,MCT1,MCT4PINK1,Parkin的表达;2.RNA干扰:siRNA-PINK1-1069和siRNA-Parkin-899观察HA-VSMCs中PINK1,Parkin的表达;3.质粒过表达:质粒转染PINK1和Parkin,观察HA-VSMCs中的PINK1和Parkin的表达;4.CCK8试剂盒检测HA-VSMCs增殖情况;5.乳酸试剂盒检测HA-VSMCs中乳酸含量;6.葡萄糖试剂盒检测HA-VSMCs中葡萄糖含量;7.BCA细胞定量试剂盒测定HA-VSMCs中的蛋白含量;8.线粒体铁螯合剂(DXZ),线粒体靶向抗氧化剂(Mito-TEMPO)处理,检测HA-VSMCs中PKM2,LDHA,MCT1,MCT4的表达;9.线粒体铁红色荧光探针罗丹明苯甲酯(RPA)和线粒体活性氧荧光探针(Mito-SOX)处理后,Delta Vision显微镜下观察活细胞中线粒体铁和线粒体ROS动态变化。结果:1.SiRNA干扰PINK1抑制Apelin-13促HA-VSMCs中PINK1、Parkin、PKM2、LDHA、MCT1和MCT4的表达;2.SiRNA干扰Parkin抑制Apelin-13促HA-VSMCs中Parkin、PKM2、LDHA、MCT1和MCT4的表达;3.质粒过表达PINK1诱导Apelin-13促HA-VSMCs中PKM2、LDHA、MCT1和MCT4的表达;4.质粒过表达Parkin诱导Apelin-13促HA-VSMCs中PKM2、LDHA、MCT1表达;5.SiRNA干扰PINK1,Parkin抑制Apelin-13促HA-VSMCs增殖,降低胞外乳酸含量,促进胞外葡萄糖量增加;6.质粒过表达PINK1,Parkin诱导Apelin-13促HA-VSMCs增殖,提高胞外乳酸含量,抑制胞外葡萄糖量增加;7.Delta Vision活细胞成像显微镜下观察,Apelin-13可以引起线粒体铁超载,促进线粒体ROS生成;8.线粒体铁螯合剂(DXZ)和线粒体靶向抗氧化剂(Mito-TEMPO)处理,抑制Apelin-13促HA-VSMCs中PKM2,LDHA,MCT1,MCT4的表达;结论:线粒体自噬引起线粒体铁超载诱导Warburg效应介导Apelin-13促HA-VSMCs增殖。