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目的:通过建立真菌性角膜炎大鼠模型,观察真菌性角膜炎自然病程的特点,并在不同时间点行组织病理学检查,观察真菌性角膜炎发病过程中组织破坏情况;研究多西环素对真菌性角膜炎发病过程中性粒细胞以及MCP-1、MMP-8表达的影响。方法:1.取健康SD大鼠32只,随机分为手术模型组和空白损伤组,每组16只,利用角膜接触镜法建立烟曲霉菌性角膜炎大鼠模型,其中手术模型组角膜接触镜镜片与角膜层间注入20ml孢子混悬液,对照组注入20ml的PBS缓冲液。分别于术后第3、5、7、10天每组取4只大鼠,裂隙灯下观察角膜炎特点,并角膜刮片行10%KOH湿片法以及细菌、真菌培养,角膜取材行组织病理学检查,观察角膜组织的病理学变化。2.取健康SD大鼠32只,随机分为多西环素组和对照组,每组16只。利用角膜接触镜法建立烟曲霉菌性角膜炎大鼠模型,多西环素组给予0.3g/L多西环素眼液点术眼,对照组给予眼液溶媒点术眼。其中眼液溶媒除不含多西环素外,其余成分与0.3 g/L多西环素眼液相同。分别于术后第3、第5、第7、第10天取4只裂隙灯显微镜下观察角膜炎特点并进行角膜炎症评分;处死并角膜取材,用于组织病理学检查观察角膜组织的病理变化,并记录各个时间点中性粒细胞的数量变化。3.取健康SD大鼠64只,随机分为多西环素组和对照组,每组32只。利用角膜接触镜法建立烟曲霉菌性角膜炎大鼠模型,多西环素组给予0.3g/L多西环素眼液点术眼,对照组给予眼液溶媒点术眼。其中眼液溶媒除不含多西环素外,其余成分与0.3 g/L多西环素眼液相同。分别于术后第3、第5、第7、第10天裂隙灯显微镜下观察角膜炎特点并进行角膜炎症评分;用空气栓塞法处死大鼠并迅速角膜取材,置于液氮保存备用。采用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测角膜MCP-1、MMP-8的mRNA基因的表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测MCP-1蛋白表达水平。结果:1.角膜刮片显微镜下可见真菌菌丝及孢子存在,真菌培养表现为典型的烟曲霉菌菌落特点。角膜病变特点:术后第1天可见结膜轻度充血,角膜水肿,接种部位出现白色混浊;第3天,结膜充血加重,角膜表面菌丝苔被覆盖;第5天,角膜水肿减轻,角膜溃疡灶开始缩小,中央白色致密溃疡灶,部分可出现前房出血或角膜后弹力膜膨出;第7天角膜溃疡灶进一步缩小,第10天逐渐形成角膜白斑或有新生血管爬入角膜缘。组织病理学检查:术后9h可见部分角膜上皮层缺失,角膜基质全层可见炎症细胞浸润;术后第3天角膜胶原纤维肿胀,浸润的炎症细胞明显增多,坏死组织脱落,溃疡形成;术后第5天可见角膜胶原纤维肿胀、变形断裂,覆盖的坏死组织周围可见浸润的中性粒细胞;术后第7天角膜上皮组织逐渐增生,胶原纤维排列紊乱,炎细胞逐渐减少;在病程的后期可见增厚的角膜上皮,角膜组织可见大量新生血管长入。2.正常大鼠角膜组织中存在极少量的中性粒细胞,大鼠感染烟曲霉菌后中性粒细胞数量明显增多,于第5天达到高峰,随后逐渐减少。与对照组相比,多西环素组的炎症评分明显低于对照组(P<0.05),多西环素组术后各个时间点中性粒细胞计数显著减少(P<0.05)。3.正常大鼠角膜组织中MCP-1、MMP-8的表达量极少或基本不表达;大鼠烟曲霉菌性角膜炎动物模型中存在MCP-1、MMP-8的明显表达,早期表达量增多,病程后期逐渐减少,但表达量但仍维持在一个较高的水平。大鼠烟曲霉菌感染后第3、第5、第7天多西环素组MCP-1mRNA和蛋白表达水平低于对照组(P<0.05);与对照组相比,第3、第5天MMP-8mRNA相对表达量减少(P<0.05)。结论:1.本研究使用的角膜接触镜法能成功建立烟曲霉菌性角膜炎大鼠模型;2.多西环素可减少大鼠烟曲霉菌性角膜炎中性粒细胞的浸润,从而减轻炎症反应;3.多西环素能下调大鼠烟曲霉菌性角膜炎MCP-1、MMP-8的表达,可能是多西环素抑制大鼠烟曲霉菌性角膜炎炎症反应的机制之一。