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目的: 研究抑癌基因WWOX对人卵巢癌细胞系HO8910生长作用的影响,寻求卵巢癌基因治疗的新途径。
方法: 将携有WWOX基因的真核表达载体体外转染卵巢癌细胞系HO8910细胞(重组质粒组),筛选稳定转染的细胞并扩增培养。用蛋白印迹法检测WWOX蛋白的表达情况,并以转染空载质粒(空质粒组)及未经转染的HO8910细胞(空白对照组)作为对照。体外实验:分别用四甲基偶氮唑蓝比色法、体外侵袭实验、琼脂克隆形成实验及流式细胞仪等分析WWOX基因对HO8910细胞生物学活性的影响。体内实验:将转染细胞接种于BALB/c裸鼠腹腔,并观察裸鼠生存时间和肿瘤生长情况。
结果:
(1) 重组质粒组细胞中WWOX蛋白能稳定表达,空质粒组及空白对照组细胞未检测到WWOX蛋白的表达。
(2) 重组质粒组各时间点的细胞增值能力较空质粒组及空白对照组明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。
(3) 重组质粒组细胞的琼脂克隆形成率(19.8%)明显低于空质粒组(54.5%)及空白对照组(56.0%),差异有统计学意义(P<0.05)。
(4) 流式细胞仪检测显示,重组质粒组中72.08%的细胞阻滞于G0/G1期,分别与空质粒组(41.02%)及空白对照组(39.31%)比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。
(5) 体外侵袭实验显示,重组质粒组穿膜细胞数为(89.7±3.1)个,分别与空质粒组[(91.2±1.3)个]及空白对照组[(91.4±1.3)个]比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。
(6) 裸鼠体内实验表明,重组质粒组裸鼠体内的致瘤能力(包括转移灶数目、重量及移植瘤最大直径、腹水量)明显低于空质粒组及空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。
结论: 抑癌基因WWOX可干扰人卵巢癌细胞系HO8910的细胞周期并抑制其生长增殖,可为卵巢癌的基因治疗提供一种新方法。